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色譜分離改變?跟著小編來(lái)排查!

閱讀:496      發(fā)布時(shí)間:2018-8-1
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  色譜分離常見(jiàn)問(wèn)題是峰形、分離狀況、洗脫時(shí)間或性能改變??梢苑謨蓚€(gè)步驟來(lái)處理不可接受的色譜分離。首先,從色譜方面來(lái)評(píng)價(jià)存在的問(wèn)題,其次,對(duì)產(chǎn)生問(wèn)題的原因進(jìn)行獨(dú)立分析。

 


  評(píng)價(jià)色譜分離時(shí)使用標(biāo)準(zhǔn)品而不是樣品。每次進(jìn)樣時(shí)應(yīng)該做好樣品的特性和色譜性能記錄,以便在出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)能夠提供歷史數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比。


  下面小編為大家?guī)?lái)導(dǎo)致色譜分離改變的常見(jiàn)原因及應(yīng)采取的解決方法:


  1系統(tǒng)不平衡


  在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,色譜柱和檢測(cè)器要有足夠的平衡時(shí)間,特別是梯度分析時(shí)需要特別注意。


  使用離子對(duì)試劑時(shí),使用充足的流動(dòng)相沖洗色譜柱,以達(dá)到充分平衡。


  2梯度分析時(shí)未經(jīng)充分平衡


  在兩次梯度分析間應(yīng)有足夠的平衡時(shí)間。


  進(jìn)樣要保證是初始時(shí)間的流動(dòng)相組分流經(jīng)色譜柱。


  未經(jīng)充分平衡時(shí)會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的保留時(shí)間。


  3泵壓力/運(yùn)行故障


  若泵的壓力不穩(wěn)定。此時(shí),需參考流量曲線圖,找出原因并糾正使泵的壓力保持平穩(wěn)。


  4室溫變化


  保證儀器周圍溫度穩(wěn)定并達(dá)到平衡。如果無(wú)法達(dá)到溫度穩(wěn)定,或者不能到到平衡,建議使用色譜柱溫箱,柱溫箱系統(tǒng)應(yīng)*將色譜柱封閉。確保預(yù)先混合的溶劑能互溶,且流動(dòng)相已經(jīng)混合均勻。


  5進(jìn)樣體積太大、濃度太高


  減小進(jìn)樣體積或稀釋原始樣品(注:使用弱溶劑,進(jìn)樣體積可增至約為柱體積的10%,使用強(qiáng)溶劑進(jìn)樣體積能達(dá)到柱體積的1%)。


  6溶劑混合問(wèn)題


  檢查溶劑之間的互溶性,如果溶劑的互溶性不好,會(huì)引發(fā)很多問(wèn)題,可參閱相關(guān)的溶劑互溶性能表。


  當(dāng)溶劑是手動(dòng)混合時(shí),使用前必須要脫氣并過(guò)濾。溶劑的管路和泵的流路部分要全部使用新流動(dòng)相置換,以排除原來(lái)殘余的溶劑和空氣。色譜柱至少需要用10倍于柱體積的流動(dòng)相來(lái)沖洗才能達(dá)到被*置換的目的。后,反復(fù)幾次用標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)樣分析以驗(yàn)證色譜系統(tǒng)的重復(fù)性。若保留時(shí)間重復(fù),則之前產(chǎn)生問(wèn)題的可能原因是流動(dòng)相和色譜系統(tǒng)自身沒(méi)有充分的平衡。


  當(dāng)溶劑是從兩個(gè)或者多個(gè)儲(chǔ)液瓶中自動(dòng)被混合時(shí),分離度改變應(yīng)采用手動(dòng)混合方式進(jìn)行排查。如果手動(dòng)混合保留時(shí)間重復(fù),則表明泵或者混合器存在問(wèn)題,此時(shí),請(qǐng)參考泵的維護(hù)手冊(cè)進(jìn)行修理或清洗。


  7色譜柱被污染


  用一根性能已知的色譜柱換下實(shí)驗(yàn)用的色譜柱,并進(jìn)行一系列標(biāo)準(zhǔn)樣品分析,比較保留時(shí)間,如果新色譜柱保留時(shí)間重復(fù),表明原色譜柱已被污染。清洗色譜柱或更換新色譜柱。


  注意事項(xiàng):


  1.引起保留時(shí)間變化的常見(jiàn)原因是系統(tǒng)不平衡,開(kāi)始分析前,系統(tǒng)必須平衡好。


  2.分析過(guò)程中溫度改變是保留時(shí)間變化的另一主要原因。


  3.建議在等度分離中盡量預(yù)先混合好流動(dòng)相。

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