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　　色譜分離常見問題是峰形、分離狀況、洗脫時間或性能改變。可以分兩個步驟來處理不可接受的色譜分離。首先，從色譜方面來評價存在的問題，其次，對產(chǎn)生問題的原因進(jìn)行獨(dú)立分析。

　　評價色譜分離時使用標(biāo)準(zhǔn)品而不是樣品。每次進(jìn)樣時應(yīng)該做好樣品的特性和色譜性能記錄，以便在出現(xiàn)問題時能夠提供歷史數(shù)據(jù)進(jìn)行對比。

　　下面小編為大家?guī)韺?dǎo)致色譜分離改變的常見原因及應(yīng)采取的解決方法：

　　1系統(tǒng)不平衡

　　在實(shí)驗(yàn)開始前，色譜柱和檢測器要有足夠的平衡時間，特別是梯度分析時需要特別注意。

　　使用離子對試劑時，使用充足的流動相沖洗色譜柱，以達(dá)到充分平衡。

　　2梯度分析時未經(jīng)充分平衡

　　在兩次梯度分析間應(yīng)有足夠的平衡時間。

　　進(jìn)樣要保證是初始時間的流動相組分流經(jīng)色譜柱。

　　未經(jīng)充分平衡時會導(dǎo)致錯誤的保留時間。

　　3泵壓力/運(yùn)行故障

　　若泵的壓力不穩(wěn)定。此時，需參考流量曲線圖，找出原因并糾正使泵的壓力保持平穩(wěn)。

　　4室溫變化

　　保證儀器周圍溫度穩(wěn)定并達(dá)到平衡。如果無法達(dá)到溫度穩(wěn)定，或者不能到到平衡，建議使用色譜柱溫箱，柱溫箱系統(tǒng)應(yīng)*將色譜柱封閉。確保預(yù)先混合的溶劑能互溶，且流動相已經(jīng)混合均勻。

　　5進(jìn)樣體積太大、濃度太高

　　減小進(jìn)樣體積或稀釋原始樣品（注：使用弱溶劑，進(jìn)樣體積可增至約為柱體積的10%，使用強(qiáng)溶劑進(jìn)樣體積能達(dá)到柱體積的1%）。

　　6溶劑混合問題

　　檢查溶劑之間的互溶性，如果溶劑的互溶性不好，會引發(fā)很多問題，可參閱相關(guān)的溶劑互溶性能表。

　　當(dāng)溶劑是手動混合時，使用前必須要脫氣并過濾。溶劑的管路和泵的流路部分要全部使用新流動相置換，以排除原來殘余的溶劑和空氣。色譜柱至少需要用10倍于柱體積的流動相來沖洗才能達(dá)到被*置換的目的。后，反復(fù)幾次用標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)樣分析以驗(yàn)證色譜系統(tǒng)的重復(fù)性。若保留時間重復(fù)，則之前產(chǎn)生問題的可能原因是流動相和色譜系統(tǒng)自身沒有充分的平衡。

　　當(dāng)溶劑是從兩個或者多個儲液瓶中自動被混合時，分離度改變應(yīng)采用手動混合方式進(jìn)行排查。如果手動混合保留時間重復(fù)，則表明泵或者混合器存在問題，此時，請參考泵的維護(hù)手冊進(jìn)行修理或清洗。

　　7色譜柱被污染

　　用一根性能已知的色譜柱換下實(shí)驗(yàn)用的色譜柱，并進(jìn)行一系列標(biāo)準(zhǔn)樣品分析，比較保留時間，如果新色譜柱保留時間重復(fù)，表明原色譜柱已被污染。清洗色譜柱或更換新色譜柱。

　　注意事項：

　　1.引起保留時間變化的常見原因是系統(tǒng)不平衡，開始分析前，系統(tǒng)必須平衡好。

　　2.分析過程中溫度改變是保留時間變化的另一主要原因。

　　3.建議在等度分離中盡量預(yù)先混合好流動相。