半制備/制備型液相色譜柱儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi), 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對運(yùn)動(dòng)時(shí), 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出, 通過檢測器時(shí), 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。

半制備/制備型液相色譜柱維護(hù)與保養(yǎng)：

    1、新色譜柱在使用前，先用純甲醇在254nm波長下處理，直至基線沖平為止，然后用甲醇:水=10:90（V:V）沖柱子，直到基線沖平為止。

    2、一般反相色譜柱使用方法：先以甲醇:水=10:90（V:V）沖洗柱子45分鐘，再換上流動(dòng)相平衡45分鐘，根據(jù)基線情況進(jìn)樣（基線漂移不符合要求時(shí)應(yīng)延長平衡時(shí)間），分析樣品完畢，流動(dòng)相繼續(xù)20分鐘（或20分鐘又上），使用緩沖鹽（或含鹽）作流動(dòng)相，應(yīng)用不含緩沖鹽（作同量的水代替緩沖鹽）的流動(dòng)相沖洗色譜柱，使色譜柱中的鹽*洗掉。再換上甲醇:水=10:90（V:V）沖洗柱子45～60分鐘，然后再用100%甲醇沖40分鐘，再放置保存。

    注意：不能用純有機(jī)溶劑直接沖洗色譜柱，防止鹽析出，堵塞色譜柱或儀器管路，而使色譜柱報(bào)廢。

    3、一般正相色譜柱使用方法：zui常用的流動(dòng)相是水和乙腈混合物。先用乙腈:水=85:15(V:V)沖洗柱子45分鐘，再換上流動(dòng)相平衡45分鐘，根據(jù)基線情況進(jìn)樣（基線漂移嚴(yán)重應(yīng)延長平衡時(shí)間），分析樣品完畢，流動(dòng)相繼續(xù)20分鐘（或20分鐘以上），再換上乙腈:水=85:15（V:V）沖洗柱子45～60分鐘，放置保存。

    4、特殊色譜柱（手性柱或異構(gòu)體柱子）使用時(shí)，除仔細(xì)閱讀說明書外，還需向所購買單位詳細(xì)咨詢使用方法及注意事項(xiàng)，確認(rèn)無誤后，方可使用。

    5、在替換溶劑時(shí)，應(yīng)確保系統(tǒng)和色譜柱中的溶劑與新溶劑互溶。如果兩種溶劑互溶性和物理性質(zhì)未知，可以把兩種溶劑倒在燒杯中觀察，以避免直接進(jìn)入HPLC系統(tǒng)可能出現(xiàn)不互溶的問題。

    6、對于反相柱，長期保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置或更長時(shí)間。正相柱可以儲存于嚴(yán)格脫水后的純正已烷中，儲存的溫度按照說明書要求儲存。

    7、柱子在裝卸、更換時(shí)，動(dòng)作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng)，以免柱床產(chǎn)生空隙。

    8、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)影響柱內(nèi)填料狀態(tài)，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行。

    9、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜柱中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>

    10、如使用柱溫控制裝置時(shí)，應(yīng)注意在通入流動(dòng)相后才能升溫。溫度波動(dòng)會(huì)引起色譜峰漂移并產(chǎn)生多種影響。使用色譜柱時(shí)，保持柱溫恒定非常重要。填料粒度不同也是選擇和考慮色譜柱使用溫度的因素之一。粒徑小于5μm的填料在溫度升高時(shí)柱床更容易塌陷，使柱效下降。如果運(yùn)用得當(dāng)，柱溫也是改善色譜分離的一個(gè)有效辦法，降溫可以增加保留時(shí)間、提高選擇性和分離度等，升溫則相反。

    11、一般色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖。

    12、色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。