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如何用高效液相色譜測(cè)定呈味核苷酸二鈉含量

   2020年09月15日 14:06  
  雞精的主要成分是呈味核苷酸二鈉和*鈉,其鮮味與呈味核苷酸二鈉和*鈉的用量比例有關(guān)。因此呈味核苷酸二鈉含量測(cè)定是評(píng)價(jià)雞精質(zhì)量的重要指標(biāo)。常用的呈味核苷酸二鈉測(cè)定法為紫外分光光度法和色譜法。其中,高效液相色譜法可以有效避免其他成分的干擾,是一種比較理想的檢測(cè)方法。
 
  1.樣品處理
 
  稱(chēng)取1g(精確至0.01g)樣品于具塞塑料離心管中,加水超聲提取10min定容至100ml容量瓶中,然后以9000rpm離心10min,取上清液1ml過(guò)微孔濾膜(0.45pm)。
 
  2.配置標(biāo)準(zhǔn)溶液
 
  標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1000mg/l)稱(chēng)取100mg(精確到0.1mg)的鳥(niǎo)苷酸二鈉(GMP)和*酸二鈉(IMP)標(biāo)準(zhǔn)品,用水溶解并定容于100ml容量瓶中。
 
  3.色譜參數(shù)
 
  色譜柱:AgilentCis不銹鋼柱(150mmx3.0mm(i.d.),5hcm);
 
  流動(dòng)相:5:95(甲醇:乙酸銨溶液(pH=6.6));
 
  流速:0.4ml/min;
 
  進(jìn)樣量:5v;
 
  柱溫:30℃;
 
  檢測(cè)波長(zhǎng):254nm。
 
  4.標(biāo)準(zhǔn)曲線
 
  配制濃度分別為1、3、5、10、30、50、100μg/ml的GMP、IMP混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,濃度由低到高檢測(cè),以濃度-峰面積作圖,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。計(jì)算GMP、IMP的相關(guān)系數(shù),檢驗(yàn)響應(yīng)值是否在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。
 
  5.回收率
 
  對(duì)樣品進(jìn)行多次平行測(cè)定,計(jì)算回收率。

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