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　　生物潔凈安全柜是當(dāng)今微生物實(shí)驗(yàn)室之必要品，特別是那些對(duì)操作者需要采取保護(hù)措施的場合。如醫(yī)療、制藥、科研等進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)提供既無菌無塵又工作安全的環(huán)境。為了讓更多用戶更加充分的了解該產(chǎn)品，接下來浙江蘇凈為您解析生物安全柜的試驗(yàn)方法。

　　1、一般要求

　　1.1 試驗(yàn)條件

　　“被測(cè)生物安全柜置于正常工作條件下”指：生物安全柜工作于說明書所規(guī)定的條件下。

　　1.2 試驗(yàn)順序

　　應(yīng)按本標(biāo)準(zhǔn)6.3條規(guī)定的順序進(jìn)行試驗(yàn)。

　　1.3 試驗(yàn)環(huán)境

　　生物安全柜的性能試驗(yàn)應(yīng)在符合下列環(huán)境要求的門口帶正壓緩沖室的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行:

　　a) 溫度： 15~30 ℃;

　　b) 相對(duì)濕度：不高于70 %;

　　c) 潔凈度：在自凈狀態(tài)下可以達(dá)到5級(jí)。

　　1.4供電電源

　　1.4.1 電源電壓偏差：±3V;

　　1.4.2 電源頻率偏差：±2Hz。

　　2、試驗(yàn)儀器

　　2.1 試驗(yàn)儀器應(yīng)定期送至具有檢定(檢驗(yàn)、校準(zhǔn))資格的計(jì)量測(cè)試機(jī)構(gòu)進(jìn)行測(cè)試，有效使用周期zui長不得超過一年。試驗(yàn)儀器檢定并校正合格后才可投入使用。

　　2.2 生物安全柜的試驗(yàn)需要以下儀器：

　　a)氣溶膠發(fā)生器

　　b) 粒子計(jì)數(shù)器(粒徑分辨率由0.3μm或0.1μm起始);

　　c) 噴霧效率≥88 %的噴霧器，符合本標(biāo)準(zhǔn)附錄A的要求;

　　d) 外徑為63mm的兩端閉合的模擬干擾圓筒(簡稱圓筒)，長度由生物安全柜的內(nèi)部尺寸決定，材質(zhì)為不銹鋼或鋁;

　　f) 撞擊采樣器(毛細(xì)管直徑為1.0mm，采樣量為12.5l/min);

　　g) 縫隙采樣器(采樣量為30l/min);

　　f) Φ90培養(yǎng)皿，培養(yǎng)基中應(yīng)含有營養(yǎng)瓊脂、大豆瓊脂或其他適合微生物生長的不含抑制劑或添加劑的介質(zhì);

　　g) 熱球式風(fēng)速儀或風(fēng)量測(cè)試儀，測(cè)量精度為±0.01m/s;

　　h) 微壓計(jì)，精度等級(jí)不低于1.5級(jí);

　　i) 干球溫度計(jì)，zui小單位分格為1℃;

　　j) 聲級(jí)計(jì)，測(cè)量范圍為50~100dB，“A”計(jì)權(quán)模式;

　　k) 照度計(jì)，能滿足1000lx以下照度的測(cè)量;

　　l) 振動(dòng)儀，zui小靈敏度達(dá)到2.5μm振幅有效值;

　　m) 接觸電流檢測(cè)儀;

　　n) 微電阻測(cè)試儀;

　　o) 耐壓測(cè)試儀，輸出交流有效值1500V，或直流2121V電壓，且持續(xù)時(shí)間能在1~60s范圍內(nèi)設(shè)定。

　　3、試驗(yàn)方法

　　3.1箱體檢漏

　　卸去被測(cè)生物安全柜的部分護(hù)板或裝飾板，暴露箱體，并將生物安全柜箱體形成一個(gè)獨(dú)立閉合系統(tǒng)。

　　將箱體加壓至500Pa，連續(xù)維持該狀態(tài)。在箱體的焊縫、墊片、貫穿部分及密封處噴涂25g/L肥皂液，以找出泄漏點(diǎn)。

　　備注：可用中性洗滌劑稀釋10倍當(dāng)肥皂液使用。

　　3.2 過濾器檢漏

　　3.2.1 排風(fēng)過濾器檢漏

　　排風(fēng)過濾器檢漏在下述方法中任選一種：

　　a) 只開排風(fēng)機(jī)，不開送風(fēng)機(jī)，使生物安全柜吸入普通環(huán)境空氣，含塵濃度不低于10000粒/L(≥0.5μm)。用粒子計(jì)數(shù)器的采樣口在排風(fēng)過濾器出風(fēng)面和邊框縫隙處之上20mm處，做掃描檢漏，掃描移動(dòng)速度≤5~20mm/s，路線應(yīng)重疊。

　　b) 通過氣溶膠發(fā)生器在排風(fēng)過濾器的上游，通過有螺紋插塞的貫穿物向被測(cè)生物安全柜的遠(yuǎn)離過濾器的靜壓箱內(nèi)導(dǎo)入氣溶膠，并在上游臨近過濾器處測(cè)量氣溶膠濃度，測(cè)點(diǎn)zui少為3點(diǎn)，分別為中心1點(diǎn)，距兩邊50mm處各一點(diǎn)。用粒子計(jì)數(shù)器的采樣口在排風(fēng)過濾器出風(fēng)面之上20mm處，做掃描檢漏，掃描移動(dòng)速度≤5~20mm/s，路線應(yīng)重疊。

　　如果檢漏標(biāo)準(zhǔn)是以0.1μm來評(píng)價(jià)，只適用方法b)。

　　檢測(cè)到的粒子數(shù)應(yīng)符合表4中第2項(xiàng)的規(guī)定。

　　3.2.2 送風(fēng)過濾器檢漏

　　環(huán)境含塵濃度≥10000粒/L(≥0.5μm)，在送風(fēng)面以下20mm處，作掃描檢漏，掃描移動(dòng)速度≤5~20mm/s，路線應(yīng)重疊。

　　檢測(cè)到的粒子數(shù)應(yīng)符合表4中第2項(xiàng)的規(guī)定。

　　3.3潔凈度

　　被測(cè)生物安全柜置于正常工作條件下運(yùn)行30min。

　　潔凈度的測(cè)量邊界距離內(nèi)表面或前窗150mm。

　　粒子計(jì)數(shù)器的采樣口置于工作臺(tái)面向上200mm高度位置，測(cè)量點(diǎn)按圖1布置。

　　潔凈度應(yīng)符合表4中第3項(xiàng)的規(guī)定。

　　3.4人員安全性

　　3.4.1儀器及采樣點(diǎn)布置(圖2)：

　　a) 把含有55ml枯草芽孢菌懸液(5 ~ 8×108/ml)的噴霧器置于安全柜左右內(nèi)壁的水平中心，其水平噴射軸應(yīng)在工作臺(tái)面向上350mm處，且平行于工作面。噴霧器的噴嘴應(yīng)置于距前窗內(nèi)側(cè)100mm處并朝向前窗。

　　b) 圓筒置于安全柜*，且中心軸位于工作臺(tái)面向上70mm處。圓筒的一端緊靠安全柜的后壁，另一端應(yīng)伸出安全柜前窗至少150mm。

　　c) 圓筒周圍設(shè)四個(gè)撞擊采樣器，它們的采樣口設(shè)置在安全柜前窗向外63mm處。其中兩個(gè)撞擊采樣器的采樣口的軸心線相隔150mm，且與圓筒頂部水平線相切。另兩個(gè)撞擊采樣器的采樣口的軸心線相隔50mm，且與圓筒底部水平線在一個(gè)水平面上。另設(shè)置兩個(gè)撞擊采樣器，其采樣口所在的水平面位于工作臺(tái)面向上360mm處，兩個(gè)采樣口的豎軸在安全柜前窗向外50mm處，并分別位于安全柜中心線兩邊各150mm處。

　　d) 設(shè)置兩個(gè)縫隙采樣器，其采樣口所在的水平面即為工作面，垂直軸線距安全柜前端外壁面150mm，且距兩邊內(nèi)壁面均為200mm處。

　　e) 作為陽性對(duì)照，一個(gè)有支撐架的瓊脂培養(yǎng)皿放在圓筒中心軸下方，且位于前窗進(jìn)風(fēng)隔柵上方或下方10mm，使其對(duì)進(jìn)入隔柵的氣流干擾zui小。

　　3.4.2 采樣程序

　　緩沖室正常運(yùn)行，自凈系統(tǒng)開啟，直至環(huán)境潔凈度達(dá)到5級(jí)后，停止自凈系統(tǒng)，生物安全柜運(yùn)行30min后開始試驗(yàn)。

　　試驗(yàn)的持續(xù)時(shí)間為30min，采樣程序見表5：

　　表5　　采樣程序

　　3.4.3細(xì)菌培養(yǎng)

　　采用一個(gè)直徑為47mm，孔徑為0.22μm的薄膜濾片過濾所有的撞擊采樣器采樣液體。在無菌狀態(tài)下，卸下濾片并置于有合適介質(zhì)的培養(yǎng)皿中。盛有濾片的培養(yǎng)皿、兩個(gè)縫隙采樣器的培養(yǎng)皿和對(duì)照培養(yǎng)皿在37℃下培養(yǎng)24~28h后檢測(cè)。若培養(yǎng)皿為陰性，則重新培養(yǎng)，并在44~48h后讀數(shù)。

　　對(duì)照培養(yǎng)皿應(yīng)是陽性。當(dāng)對(duì)照培養(yǎng)皿內(nèi)含有≥300個(gè)枯草桿菌的菌落，稱其為陽性。

　　應(yīng)按6.3.4.2和6.3.4.3的程序進(jìn)行三次試驗(yàn)。

　　6.3.4.4 對(duì)于新產(chǎn)品或經(jīng)過重大改型設(shè)計(jì)的生物安全柜在下述條件下按6.3.4.2和6.3.4.3的程序分別重復(fù)進(jìn)行試驗(yàn)：

　　a) 吸入口風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.015m/s，送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速+0.05±0.015m/s;

　　b) 吸入口風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s，送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s。

　　3.4.5 試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)環(huán)境內(nèi)的各個(gè)表面進(jìn)行擦拭消毒。

　　3.5 受試樣本安全性

　　3.5.1儀器及采樣點(diǎn)布置(圖3，圖4)：

　　a) 含有55ml芽孢菌懸液(5 ~ 8×106/ml)的噴霧器置于安全柜的水平中心，其水平噴射軸應(yīng)在工作臺(tái)面向上200mm處，且平行于工作面。噴霧器的噴嘴應(yīng)置于距前窗外側(cè)100mm處，并朝向前窗。

　　b) 圓筒置于安全柜*，且中心軸位于工作臺(tái)面向上70mm處。圓筒的一端緊靠安全柜的后壁，另一端應(yīng)伸出安全柜前窗至少150mm。

　　c)在工作臺(tái)面上滿布瓊脂培養(yǎng)皿，然后依次打開培養(yǎng)皿蓋子。

　　d) 作為陽性對(duì)照，一個(gè)有支撐架的瓊脂培養(yǎng)皿放在圓筒中心軸下方，且位于前窗進(jìn)風(fēng)隔柵上方或下方10mm，使其對(duì)進(jìn)入隔柵的氣流干擾zui小。

　　3.5.2 采樣程序

　　緩沖室正常運(yùn)行，自凈系統(tǒng)開啟，直至環(huán)境潔凈度達(dá)到5級(jí)后，停止自凈系統(tǒng)，生物安全柜運(yùn)行30min后開始試驗(yàn)。

　　噴霧器運(yùn)行5分鐘。噴霧器停止5分鐘后，為瓊脂培養(yǎng)皿上蓋。

　　3.5.3細(xì)菌培養(yǎng)

　　培養(yǎng)皿在37℃下培養(yǎng)24~28h后檢測(cè)。若培養(yǎng)皿為陰性，則重新培養(yǎng)，并在44~48h后讀數(shù)。

　　對(duì)照培養(yǎng)皿在37℃下培養(yǎng)24~28h后檢測(cè)應(yīng)是陽性。當(dāng)對(duì)照培養(yǎng)皿內(nèi)含有≥300個(gè)枯草桿菌的菌落，稱其為陽性。

　　應(yīng)按6.3.5.2和6.3.5.3的程序進(jìn)行三次試驗(yàn)。

　　3.5.4對(duì)于新產(chǎn)品或經(jīng)過重大改型設(shè)計(jì)的生物安全柜在下述條件下按6.3.5.2和6.3.5.3的程序分別重復(fù)進(jìn)行試驗(yàn)：

　　a) 吸入口風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.015m/s，送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速+0.05±0.015m/s;

　　b) 吸入口風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s，送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s。

　　3.5.5 試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)環(huán)境內(nèi)各個(gè)表面進(jìn)行擦拭消毒。

　　3.6 交叉感染

　　3.6.1儀器及采樣點(diǎn)布置(圖5)：

　　a) 含有55ml枯草芽孢菌懸液(5 ~ 8×104/ml)的噴霧器，其水平噴射軸位于工作臺(tái)面向上76~127mm處，且平行于工作面。噴霧器的背面緊靠左(右)內(nèi)壁的氣流分界面，噴嘴正對(duì)右(左)內(nèi)壁。

　　b) 瓊脂培養(yǎng)皿按以下方法布置：

　　位于噴霧器噴嘴的下方設(shè)置兩個(gè)對(duì)照培養(yǎng)皿，距右(左)內(nèi)壁360mm處布置一列培養(yǎng)皿，在緊靠上述培養(yǎng)皿右(左)側(cè)再布置一列到兩列培養(yǎng)皿。

　　3.6.2 采樣程序

　　緩沖室正常運(yùn)行，自凈系統(tǒng)開啟，直至環(huán)境潔凈度達(dá)到5級(jí)后，停止自凈系統(tǒng)，生物安全柜運(yùn)行30min后開始試驗(yàn)。

　　噴霧器運(yùn)行5分鐘。噴霧器停止15分鐘后，為瓊脂培養(yǎng)皿上蓋。

　　3.6.3細(xì)菌培養(yǎng)

　　培養(yǎng)皿在37℃下培養(yǎng)24~28h后檢測(cè)。若培養(yǎng)皿為陰性，則重新培養(yǎng)，并在44~48h后讀數(shù)。

　　對(duì)照培養(yǎng)皿在37℃下培養(yǎng)24~28h后檢測(cè)應(yīng)是陽性。當(dāng)對(duì)照培養(yǎng)皿內(nèi)含有≥300個(gè)枯草桿菌的菌落，稱其為陽性。

　　應(yīng)按3.6.2和3.6.3的程序進(jìn)行三次試驗(yàn)。

　　3.6.4對(duì)于新產(chǎn)品或經(jīng)過重大改型設(shè)計(jì)的生物安全柜在下述條件下按6.3.6.2和6.3.6.3的程序分別重復(fù)進(jìn)行試驗(yàn)：

　　a) 吸入口風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.015m/s，送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速+0.05±0.015m/s;

　　b) 離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s，送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s。

　　3.6.5 試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)環(huán)境內(nèi)各個(gè)表面進(jìn)行擦拭消毒。

　　3.7 送風(fēng)風(fēng)速

　　在距離內(nèi)側(cè)壁板及前窗100mm圍成的，在工作臺(tái)面上方300mm處的平面區(qū)域內(nèi)測(cè)量垂直氣流的平均風(fēng)速。

　　測(cè)量點(diǎn)服從行、列均為150m m的網(wǎng)格分布。若去除測(cè)量邊界后凈尺寸不等于15的整數(shù)倍，則允許修正測(cè)量點(diǎn)距離，但每列至少測(cè)量3點(diǎn)，每行至少測(cè)量7點(diǎn)。

　　送風(fēng)風(fēng)速為各測(cè)量點(diǎn)讀數(shù)的算術(shù)平均值。

　　送風(fēng)風(fēng)速應(yīng)符合表4中第7項(xiàng)的規(guī)定。

　　3.8 工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)速

　　3.8.1 對(duì)I級(jí)和*進(jìn)行工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)速試驗(yàn)。試驗(yàn)步驟如下：

　　a) 對(duì)試驗(yàn)環(huán)境停止送風(fēng)。

　　b) 測(cè)量排風(fēng)口速度

　　用套管和排風(fēng)口法蘭連接，套管長度等于排風(fēng)口長邊的2倍。將套管截面均分為約100mm×100mm的方塊，每一塊中心為一個(gè)測(cè)點(diǎn)，測(cè)點(diǎn)總數(shù)不少于6個(gè)。在套管中部垂直兩邊正對(duì)每一列方塊中心打孔，風(fēng)速儀測(cè)桿伸入孔中測(cè)量。

　　c) 求出排風(fēng)量

　　以套管截面平均風(fēng)速乘以套管截面積即得排風(fēng)量(m3/s)。

　　d) 測(cè)量送風(fēng)面速度

　　在送風(fēng)散流板垂直向下150mm，距邊墻50mm圍成的平面區(qū)域內(nèi)測(cè)量送風(fēng)風(fēng)速。該平面的測(cè)量點(diǎn)服從行、列約為100mm的網(wǎng)格分布。測(cè)點(diǎn)總數(shù)不少于6個(gè)。

　　e) 求出送風(fēng)量

　　以送風(fēng)面平均風(fēng)速乘以送風(fēng)面面積即得送風(fēng)量(m3/s)。

　　f) 排風(fēng)量(m3/s)與送風(fēng)量(m3/s)的差值即為計(jì)算得到的工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量(m3/s)。

　　g) 計(jì)算得到的工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量(m3/s)與前窗開口面面積(m2)的商，即為工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)速(m/s)，該數(shù)值應(yīng)符合表4中第8項(xiàng)的規(guī)定。

　　3.8.2 Ⅲ級(jí)生物安全柜手套入口的風(fēng)速測(cè)定，試驗(yàn)步驟如下：

　　開啟生物安全柜。把風(fēng)速儀放在手套入口的中心處，并記錄測(cè)量的風(fēng)速，測(cè)量時(shí)間zui少為1分鐘。另一只手套入口的中心處用風(fēng)速儀進(jìn)行重復(fù)測(cè)量。

　　3.9 壓差

　　被測(cè)生物安全柜置于正常工作條件下，柜上微壓差計(jì)或用規(guī)定微壓差計(jì)測(cè)出柜內(nèi)外壓差。

　　3.10溫升

　　被測(cè)生物安全柜置于正常工作條件下連續(xù)運(yùn)行4h。

　　將一個(gè)干球溫度計(jì)置于被測(cè)生物安全柜前窗開口面中心向外80mm處測(cè)量環(huán)境溫度，另一個(gè)干球溫度計(jì)置于被測(cè)生物安全柜工作臺(tái)面的幾何中心向上300mm處測(cè)量操作區(qū)溫度。

　　當(dāng)溫度計(jì)上的數(shù)值達(dá)到穩(wěn)態(tài)后，兩個(gè)溫度計(jì)的差值應(yīng)符合表4中第10項(xiàng)的規(guī)定。

　　3.11 噪聲

　　對(duì)試驗(yàn)環(huán)境停止送風(fēng)。

　　聲級(jí)計(jì)置于“A”計(jì)權(quán)模式。

　　在被測(cè)生物安全柜前壁面中心水平向外300mm，高度距地面1100mm處測(cè)量。

　　噪聲讀數(shù)按表6修正。

　　表6 噪聲讀數(shù)修正

　　處理得到的數(shù)值應(yīng)符合表4中第11項(xiàng)的要求。

　　3.12 照度

　　在工作臺(tái)面上，沿工作臺(tái)面內(nèi)壁面水平中心線每隔300mm設(shè)置一個(gè)測(cè)量點(diǎn)。與邊墻距離<150mm時(shí)，不再設(shè)置。

　　被測(cè)生物安全柜置于正常工作條件下，重復(fù)各測(cè)量點(diǎn)檢測(cè)。被測(cè)生物安全柜照度為各測(cè)量點(diǎn)照度的算術(shù)平均值，并應(yīng)符合表4中第12項(xiàng)的要求。

　　3.13 振動(dòng)幅值

　　被測(cè)生物安全柜置于正常工作條件。

　　將振動(dòng)儀的振動(dòng)傳感器牢固地固定在工作臺(tái)面的中心，測(cè)量生物安全柜工作時(shí)的總振幅。

　　工作臺(tái)面的振動(dòng)幅值應(yīng)符合表4中第13項(xiàng)的規(guī)定。

　　3.14 工作臺(tái)面抗變形

　　將面積為250mm×250mm、重量為23kg的測(cè)試負(fù)載均勻地施加于被測(cè)生物安全柜臺(tái)面*，在載重條件下測(cè)量安全柜臺(tái)面前部邊緣中心至地面的距離。

　　負(fù)載及空載條件下安全柜臺(tái)面前部邊緣中心至地板的變化距離應(yīng)小于5mm。

　　3.15 接觸電流

　　按GB/T12113 接觸電流和保護(hù)導(dǎo)體電流的測(cè)量方法進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合表4

　　中第15項(xiàng)的規(guī)定。

　　3.16 接地電阻

　　被測(cè)生物安全柜所有的功能開關(guān)均置于“斷”位，用微電阻測(cè)試儀測(cè)量電源插頭“地”插銷與可觸及件之間的電阻，電阻值應(yīng)符合表4中第16項(xiàng)的規(guī)定。

　　3.17 耐電壓

　　被測(cè)生物安全柜電源輸入端各極插銷與箱體接地端之間應(yīng)能承受50Hz正弦電壓1500V有效值工頻電壓持續(xù)1min，應(yīng)無擊穿和閃絡(luò)現(xiàn)象。

　　3.18氣流流向

　　3.18.1 工作區(qū)內(nèi)氣流

　　在Ⅰ級(jí)、*的工作區(qū)域離開口處約50mm的整個(gè)截面上發(fā)可視性煙霧，觀察煙霧，應(yīng)符合表4中第18項(xiàng)規(guī)定。

　　3.18.2 吸入口氣流

　　在*外離開口處約100mm的整個(gè)截面上發(fā)可視性煙霧，觀察煙霧，應(yīng)符合表4中第18項(xiàng)規(guī)定。

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