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酶-重量法1.原理：樣品分別用α-*、蛋白酶、葡萄糖苷酶進(jìn)行酶解消化以去除蛋白質(zhì)和可消化的淀粉?？偵攀忱w維（TDF）是先酶解，然后用乙醇沉淀，再將沉淀物過濾，將TDF殘?jiān)靡掖己捅獩_洗，干燥稱重。不溶性和可溶性膳食纖維（IDF和SDF）是酶解后將IDF過濾，過濾后的殘?jiān)脽崴疀_洗，經(jīng)干燥后稱重。SDF是將上述濾出液用4倍量的95%乙醇沉淀，然后再過濾，干燥，稱重。 TDF、IDF和SDF量通過蛋白質(zhì)、灰分含量進(jìn)行校正。2.適用范圍AOAC991.43 本方法適用于各類植物性食物和保健食品。3.儀器3.1燒杯：400或600ml高腳型。3.2 過濾用坩堝：玻料濾板，美國(guó)試驗(yàn)和材料學(xué)會(huì)（ASTM）40-60μm，Pyrex 60ml（Corning No.36060 buchner，或同等的）。如下處理：（1） 在灰化爐525℃灰化過夜。爐溫降至130℃以下取出坩堝。（2） 用真空裝置移出硅藻土和灰質(zhì)。（3） 室溫下用2%清洗溶液浸泡1小時(shí)。（4） 用水和去離子水沖洗坩堝；然后用15ml丙酮沖洗然后風(fēng)干。（5） 在干燥的坩堝中加0.5g硅藻土，在130℃烘干恒重。（6） 在干燥器中冷卻1小時(shí)，記錄坩堝加硅藻土重量，至0.1mg。3.3 真空裝置：（1） 真空泵或抽氣機(jī)作為控制裝置。（2） 1L的厚壁抽濾瓶。（3） 與抽濾瓶相配套的橡皮圈。3.4振蕩水浴箱：（1） 自動(dòng)控溫使溫度能保持在98±2℃。（2） 恒溫控制在60℃。3.5 天平：分析級(jí)，至±0.1mg。3.6馬福爐：溫度控制在525±5℃。3.7干燥箱：溫度控制在105和130±3℃。3.8干燥器：用二氧化硅或同等的干燥劑。干燥劑兩周一次在130℃烘干過夜。3.9 PH計(jì)：注意溫控，用pH4.0、7.0和10.0緩沖液標(biāo)化。3.10 移液管及套頭：容量100μl和5ml。3.11 分配器或量筒：（1） 15±0.5ml，供分配78%的乙醇，95%的乙醇以及丙酮。（2） 40±0.5ml，供分配緩沖液。3.12. 磁力攪拌器和攪拌棒。4. 試劑全過程使用去離子水，試劑不加說明均為分析純?cè)噭?/font>4.1 乙醇溶液：（1） 85%：加895ml95%乙醇在1L量筒中，用水稀釋至刻度。（2） 78%：加821ml95%乙醇在1L量筒中，用水稀釋至刻度。4.2 丙酮：4.3 供分析用酶：在0-5℃下儲(chǔ)存。（1） 熱穩(wěn)定α-*溶液：Cat. No. A3306，Sigma Chemical Co.，St. Louis，MO63178，或 Termamyl 300L，Cat. No. 361-6282，Novo-Nordisk，Bagsvaerd，Denmark，或等效的酶。（2） 蛋白酶：Cat. No. P3910，Sigma Chemical Co.，或等效的。當(dāng)天用MES/TRIS緩沖液中現(xiàn)配50mg/ml酶溶液。（3） 淀粉葡糖苷酶溶液：Cat. No. AMG A9913，Sigma Chemical Co.，或等效的。4.4 硅藻土：酸洗（Celite 545 AW，No.C8656，Sigma Chemical Co.，或等效的）。4.5 洗滌液：兩者挑一。（1） 鉻酸：120g重各酸鈉Na2Cr2O7·2H2O，1000ml蒸餾水和1600ml濃硫酸。（2） 實(shí)驗(yàn)室用液體清潔劑，預(yù)備急需清洗的（Micro，International Products Corp.，Trenton，NJ08016，或等效的）。用水配制2%溶液。4.6 MES-TRIS緩沖液：0.05mol/L，溫度在24℃時(shí)pH值為8.2。（1） MES：2-（N-嗎啉代）磺酸基乙烷（No.M-8250，Sigma Chemical Co.或等效的）。（2） TRIS：三羥（羥甲基）氨基甲烷（No.T-1503，Sigma Chemical Co.或等效的）。在1.7L的蒸餾水中溶解19.52gMES和12.2gTRIS，用6mol/L NaOH調(diào)pH到8.2，用水定容至2L。（注意：24℃時(shí)的pH為8.2，但是，如果緩沖液溫度在20℃，pH就為8.3，如果溫度在28℃，pH為8.1。為了使溫度在20-28℃之間，需根據(jù)溫度調(diào)整pH值。）4.7 鹽酸溶液：0.561mol//L，加93.5ml6mol/L鹽酸到700ml水中，用水定容至1L。