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在分子生物學(xué)中紫外分光光度計(jì)有哪些應(yīng)用？

2021年03月05日 15:14

　　分子生物學(xué)是在分子水平研究蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子結(jié)構(gòu)與功能的學(xué)科，是生物學(xué)的前沿領(lǐng)域。分子生物學(xué)的研究需要對生物大分子進(jìn)行檢測，常用的儀器包括PCR儀、核酸提取儀等。除了專門的分子生物學(xué)儀器，通用的化學(xué)分析儀器也在分子生物學(xué)中有廣泛的應(yīng)用，比如紫外分光光度計(jì)。

　　紫外分光光度計(jì)在分子生物學(xué)中主要有以下幾點(diǎn)應(yīng)用：

　　1.蛋白質(zhì)含量測定

　　(1)直接定量法：

　　利用紫外分光光度計(jì)直接定量檢測蛋白質(zhì)含量是利用蛋白質(zhì)含有的*和*在紫外光區(qū)280 nm處具有大吸收的特征，根據(jù)該波長的吸光度與蛋白質(zhì)濃度成正比的關(guān)系測定其含量。

　　直接定量法適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。特點(diǎn)在于快速簡便，缺點(diǎn)包括易受到平行物質(zhì)如DNA的干擾、敏感度差、要求蛋白的濃度較高等。

　　(2)比色法：蛋白質(zhì)的組成成分氨基酸與外加的顯色基團(tuán)或染料反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物的濃度與氨基酸的數(shù)量相關(guān)，從而反映蛋白質(zhì)濃度。常見方法包括BCA、Bradford、Lowry等幾種。

　　2.核酸濃度測定和純度判定

　　核酸的大吸收波長是260 nm，蛋白質(zhì)的大吸收波長是280 nm。在波長260 nm的紫外線下，1 OD值光密度相當(dāng)于約50 μg/mL雙鏈DNA，約40 μg/mL單鏈DNA或RNA。通過OD260與OD280的比值還可初步判斷核酸的純度，純DNA和RNA樣品的0D260/280分別為1.8和2.0，若樣品中有蛋白質(zhì)或酚的污染，比值將低于此值。

　　紫外分光光度計(jì)一般只能測定質(zhì)量濃度大于0.25 μg/mL的核酸濃度。

　　3.細(xì)菌密度測定

　　通常情況下，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和目測推斷細(xì)菌的生長密度和生長期，而OD600是用來檢測細(xì)菌濃度的重要指標(biāo)，是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標(biāo)準(zhǔn)方法。實(shí)驗(yàn)中以未加菌液的培養(yǎng)液作為空白液，再定量培養(yǎng)后的含菌培養(yǎng)液。注意受試的樣品不能離心，要保持細(xì)菌懸浮狀。

　　紫外分光光度法是基礎(chǔ)的光譜分析方法，根據(jù)被測量物質(zhì)分子對紫外-可見波段范圍單色輻射的吸收或反射強(qiáng)度來進(jìn)行物質(zhì)的定量、定性或結(jié)構(gòu)分析。紫外分光光度法的應(yīng)用很廣泛，可用于化學(xué)、材料、生物、醫(yī)學(xué)、食品、環(huán)境等領(lǐng)域。分子生物學(xué)中的應(yīng)用是指其中的一小部分。

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