賽默飛高效液相色譜 （HPLC） 是柱色譜的一種形式，它在高壓下將溶劑中的樣品混合物或分析物（稱為流動相）泵送通過帶有色譜填料（固定相）的色譜柱。樣品由氦氣或氮?dú)獾囊苿虞d氣流攜帶。HPLC 能夠分離和鑒定任何樣品中存在的化合物，這些化合物可以以低至萬億分之一的痕量濃度溶解在液體中。由于這種多功能性，HPLC 被用于各種工業(yè)和科學(xué)應(yīng)用，例如制藥、環(huán)境、法醫(yī)學(xué)和化學(xué)品。

柱色譜
柱色譜中的固定相通常是細(xì)小的吸附劑固體；能夠在其外表面上保持氣體或液體顆粒的固體。柱色譜中通常使用的色譜柱看起來類似于巴斯德移液器（巴斯德移液器用作小規(guī)模柱色譜中的色譜柱）。首先用玻璃棉或多孔板塞住色譜柱的狹窄出口，以支撐色譜柱填充材料并防止其從管子中逸出。然后將吸附劑固體（通常是二氧化硅）緊密地裝入玻璃管中，制成分離柱。必須小心地將固定相填充到玻璃柱中，以形成材料的均勻分布。吸附劑的均勻分布對于盡量減少柱內(nèi)氣泡和/或通道的存在很重要。為完成色譜柱的制備，將用作流動相的溶劑通過干燥的色譜柱。然后稱該柱是“潤濕的”，并且在整個實(shí)驗(yàn)過程中該柱必須保持濕潤。正確準(zhǔn)備色譜柱后，將要分離的樣品放置在濕柱的頂部?？梢栽阪溄又姓业教畛浞蛛x柱的照片。

組件
色譜法是有效的，因?yàn)榛旌衔镏械牟煌M分會以不同的程度被吸引到固定相的吸附劑表面，這取決于每種組分的極性及其*的結(jié)構(gòu)特征，以及它與流動相的相互作用。使用柱色譜實(shí)現(xiàn)的分離基于與樣品相關(guān)的因素。因此，與對流動相具有更高親和力的組分相比，更容易被固定相吸引的組分將以更慢的速率向下遷移到分離柱。此外，分離效果取決于所用吸附劑固體的性質(zhì)和流動相溶劑的極性。

固定相
用作固定相的吸附材料類型對于有效分離混合物中的組分至關(guān)重要?？梢允褂脦追N不同的固體。可以根據(jù)固體的粒度和活性來選擇吸附材料。吸附劑的活性用其活性等級表示，活性等級是吸附劑對樣品溶液中溶質(zhì)吸引力的量度。具有高活性等級的固體是*無水的那些。硅膠和氧化鋁是常用的吸附劑。氧化鋁非常適合需要特定條件才能充分分離的樣品。但是，使用非中性固定相時應(yīng)非常謹(jǐn)慎，氧化鋁固定相中 pH 值的升高或降低可能會導(dǎo)致混合物組分內(nèi)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。然而，硅膠的活性不如氧化鋁，通?？捎米魅芤褐写蠖鄶?shù)組分的吸附劑。二氧化硅它具有高樣品容量，使其成為受歡迎的吸附材料。

流動相
還必須選擇合適的流動相，以便更好地分離未知混合物中的組分。該洗脫液將根據(jù)其相對于樣品和固定相的極性進(jìn)行選擇。使用強(qiáng)極性吸附劑固定相（如氧化鋁）時，用作流動相的極性溶劑會被固定相吸附，這可能會置換混合物中的樣品分子，并可能導(dǎo)致樣品組分的洗脫變化很快。這將提供很少的樣品分離，因此好用較低極性的溶劑開始洗脫，首先洗脫固定相上弱吸附的組分。也可以在分離過程中改變?nèi)軇┮愿淖儤O性，從而更及時地分別洗脫各種組分。高效液相色譜(HPLC)。

     快速色譜儀器通過對溶劑施加壓力來使流動相通過色譜柱，以便更快地獲得結(jié)果。然而，在快速色譜法中，僅對溶液內(nèi)的系統(tǒng)施加中等壓力。在 HPLC 中，高性能泵可以在色譜柱中施加高達(dá) 5000 psi 的壓力。