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掃描電鏡是1965年發(fā)明的較現(xiàn)代的細(xì)胞生物學(xué)研究工具,它具有制樣簡(jiǎn)單、放大倍數(shù)可調(diào)范圍寬、圖像的分辨率高、景深大等特點(diǎn)。

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掃描電鏡是1965年發(fā)明的較現(xiàn)代的細(xì)胞生物學(xué)研究工具,它具有制樣簡(jiǎn)單、放大倍數(shù)可調(diào)范圍寬、圖像的分辨率高、景深大等特點(diǎn)。近年來,掃描電鏡已廣泛地應(yīng)用在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、等學(xué)科的領(lǐng)域中。

上海掃描電鏡實(shí)驗(yàn)外包樣品的初步處理

   1) 取材
取材的基本要求和透射電鏡樣品制備相同。但是,對(duì)掃描電鏡來說,樣品可以稍大些,面積可達(dá)8mm×8mm,厚度可達(dá)5mm。對(duì)于易卷曲的樣品如血管、胃腸道粘膜等,可固定在濾紙或卡片紙上,以充分暴露待觀察的組織表面。
   2) 樣品的清洗
用掃描電鏡觀察的部位常常是樣品的表面,即組織的游離面。由于樣品取自活體組織,其表面常有血液、組織液或粘液附著,這會(huì)遮蓋樣品的表面結(jié)構(gòu),影響觀察。因此,在樣品固定之前,要將這些附著物清洗干凈。清洗的方法有以下幾種:
      a.用等滲的生理鹽水或緩沖液清洗;
      b.用5%的蘇打水清洗;
      c.用超聲震蕩或酶消化的方法進(jìn)行處理。例如清洗腸粘膜表面的粘液,可用下面的方法:
清洗液配方:透明質(zhì)酸酶 300ug α-* 10 mg生理鹽水 100 ml清洗液的pH為5.5~6。清洗的方法是將樣品浸泡在配好的清洗液中,邊浸泡邊震蕩30分鐘,后用雙蒸水洗3次。無論用哪種清洗方法,注意在清洗時(shí)不要損傷樣品。
   3) 固定
固定所用的試劑和透射電鏡樣品制備相同,常用戊二醛及鋨酸雙固定。由于樣品體積較大,固定時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)。也可用快速冷凍固定。
   4) 脫水
樣品經(jīng)漂洗后用逐級(jí)增高濃度的酒精或丙酮脫水,然后進(jìn)入中間液,一般用醋酸異戊酯作中間液。掃描電鏡生物樣品制備技術(shù)大多數(shù)生物樣品都含有水分,而且比較柔軟,因此,在進(jìn)行掃描電鏡觀察前,要對(duì)樣品作相應(yīng)的處理。掃描電鏡樣品制備的主要要求是:盡可能使樣品的表面結(jié)構(gòu)保存好,沒有變形和污染,樣品干燥并且有良好導(dǎo)電性能。

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組織、細(xì)胞

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實(shí)驗(yàn)周期:3-4周


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