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大鼠CD44分子(CD44)ELISA Kit

參考價(jià)面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱 上海栩冉生物科技有限公司
  • 品牌
  • 型號
  • 所在地 上海市
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間 2017/12/8 20:56:53
  • 訪問次數(shù) 80

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大鼠CD44分子(CD44)ELISA Kit上海素爾生物科技有限公司提供,1-2個(gè)工作日發(fā)貨,提供免費(fèi)代測服務(wù),收到標(biāo)本起一周內(nèi)提供原始數(shù)據(jù)和zui終數(shù)據(jù),提供ELISA各種樣本收集、處理、保存方法,歡迎您致電咨詢庫存狀態(tài),售后說明等。

詳細(xì)信息 在線詢價(jià)

大鼠CD44分子(CD44)ELISA Kit上海素爾生物為您傾情供應(yīng),**技術(shù),嚴(yán)格工藝流程,*抗體/抗原,嚴(yán)格QC檢測后方可出庫,請放心購買!致電:,! 

中文名稱:Rat cluster Of differentiation,CD44 ELISA Kit

英文名稱:大鼠CD44分子(CD44)ELISA Kit

儲(chǔ)存溫度::-20℃(較長時(shí)間不用時(shí));2-8℃(頻繁使用時(shí))

有效期:6個(gè)月

產(chǎn)品供應(yīng)商:上海素爾生物科技有限公司

1-2個(gè)工作日發(fā)貨,提供免費(fèi)代測服務(wù),收到標(biāo)本起一周內(nèi)提供原始數(shù)據(jù)和zui終數(shù)據(jù)

ELISA各種樣本收集、處理、保存方法

1. 血清標(biāo)本收集、處理、保存方法:

用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本,全血標(biāo)本室溫放置1-2 h或4℃過夜,然后4℃、3000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時(shí)間),避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。

2. 血漿標(biāo)本收集、處理、保存方法:

根據(jù)樣本要求選擇EDTA或*或枸緣酸鈉作為抗凝劑,用含抗凝劑的*或離心管采集血液標(biāo)本,室溫混合20 min左右,然后4℃、3000 rpm/min離心20 min,小心收集上清即為血漿。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時(shí)間),避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。

3. 尿液標(biāo)本收集、處理、保存方法:

用干凈容器收集尿液,4℃、3000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時(shí)間),避免反復(fù)凍融。

4. 唾液標(biāo)本收集、處理、保存方法:

用干凈離心管收集唾液,4℃、3000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時(shí)間),避免反復(fù)凍融。

細(xì)胞標(biāo)本收集、處理、保存方法:

(1)細(xì)胞培養(yǎng)上清

 取細(xì)胞培養(yǎng)上清到干凈離心管中,4℃、3000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時(shí)間),避免反復(fù)凍融。

細(xì)胞裂解液

收集細(xì)胞培養(yǎng)液,4℃、3000 rpm/min離心20 min,棄去上清,用預(yù)冷的PBS(0.01M,PH 7.4)洗滌三次。加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通過反復(fù)凍融,使細(xì)胞充分裂解。然后4℃、10000 rpm/min離心20 min,除去細(xì)胞碎片,取上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時(shí)間),避免反復(fù)凍融。

6. 植物標(biāo)本收集、處理、保存方法:

取適量大小組織塊(一般0.2-0.5 g),用預(yù)冷的PBS緩沖液(0.01M,PH 7.4)漂洗三次,濾紙拭干水分。準(zhǔn)確稱重,放入勻漿管中,加入4倍體積的勻漿介質(zhì)(0.05 mol/L Tris-HCl,pH 7.4 PBS緩沖液)于勻漿管中,冰水浴條件下,剪碎組織塊,手工勻漿或機(jī)器勻漿,制成勻漿液。4℃、10000 rpm/min離心20 min,取上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時(shí)間),避免反復(fù)凍融。

7. 糞便標(biāo)本收集、處理、保存方法:

采集時(shí)用干凈的竹簽挑取糞便樣本到離心管中,向離心管中加入適量PBS緩沖液(0.01M,PH 7.4),攪拌均勻。然后4℃、10000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時(shí)間),避免反復(fù)凍融。

8. 組織標(biāo)本收集、處理、保存方法:

將組織樣本用PBS緩沖液(0.01M,PH 7.4)沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。將組織塊稱重,記錄后剪碎(碎塊盡量?。?。將組織按一定的比例(通常組織重量:PBS體積=1:9)加入預(yù)冷的PBS緩沖液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)中勻漿,勻漿時(shí)置于冰上。吸取勻漿液到離心管中,4℃、10000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時(shí)間),避免反復(fù)凍融。

大鼠CD44分子(CD44)ELISA Kit

1.ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完, 板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,*使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

試劑盒靈敏度、精密度、穩(wěn)定性

1. 靈敏度:有二層含義,1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的zui低量的能力;2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。 

2. 特異性:常用交叉反應(yīng)率表示。其越高說明特異性越好。 

3. 精密度:ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV,其值應(yīng)小于15%;定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍

4. 穩(wěn)定性:試劑在規(guī)定條件下能儲(chǔ)存的時(shí)間,一般采用破壞性試驗(yàn)即將試劑存放于37℃保存,定期測定其靈敏度,特異性和精密度等指標(biāo),直到其質(zhì)量指標(biāo)開始下降為止,通常認(rèn)為37℃每穩(wěn)定一天相當(dāng)于4-10℃保存一個(gè)半月。 

5. 簡便性:指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下,實(shí)驗(yàn)和測定步驟越少越好,在定性試驗(yàn)中結(jié)果判斷簡單明了,定量試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算也應(yīng)簡單。

6. 安全性:指試劑對操作者和環(huán)境安全無害無傳染性。 

7. 經(jīng)濟(jì)性:試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本而市場價(jià)格比較合理。 

試劑評價(jià):需要有的確證方法確證的樣品進(jìn)行檢測,一般實(shí)驗(yàn)室不易取得此類樣品,每新購進(jìn)一次試劑評價(jià)也很麻煩??梢酝ㄟ^間接的回收實(shí)驗(yàn)對試劑進(jìn)行選擇

ELISA試劑盒常見問題及分析

問題分析

若試驗(yàn)效果不好,請及時(shí)對顯色結(jié)果拍照,保留未用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后我公司為你解決問題。同時(shí)您也可以參考以下資料:

問題描述

可能原因

相應(yīng)對策

標(biāo)準(zhǔn)曲線梯度差

吸液或加液不準(zhǔn)

檢查移液器及吸頭

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋不正確

稀釋標(biāo)準(zhǔn)品時(shí),反復(fù)吹打,確保*混勻

洗滌不*

保證洗滌時(shí)間和洗滌次數(shù)及每孔的加液量

顯色很弱或無色

孵育時(shí)間太短

保證充足的孵育時(shí)間

實(shí)驗(yàn)溫度不正確

使用*的實(shí)驗(yàn)溫度

試劑提及不夠或漏加

檢查洗液及加液過程,保證所有試劑按順序足量添加

稀釋不正確

讀數(shù)數(shù)值低

酶標(biāo)儀設(shè)置不正確

在酶標(biāo)儀上檢查波長及濾光片設(shè)置

提前打開酶標(biāo)儀預(yù)熱

變異系數(shù)大

加液不正確

檢查加液情況

背景值高

檢測抗體的工作濃度

使用*的稀釋倍數(shù)

酶標(biāo)板洗滌不*

重新閱讀操作手冊,保證清洗*;如果用自動(dòng)洗板機(jī),請檢查所有的出口是否有堵塞

洗液有污染

配置新鮮的洗液

靈敏度低

ELISA試劑盒保存

按照說明書要求保存相關(guān)試劑

讀數(shù)前未終止

OD讀數(shù)前應(yīng)在每孔中加入終止液

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*個(gè)主要的參數(shù)是洗滌量。自動(dòng)洗板機(jī)會(huì)分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景,那么不要猶豫,將洗滌量調(diào)為高,是比包被體積更高。太少的洗滌液會(huì)讓一部分分析表面洗滌不到,從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。ELISA板的制造商通常會(huì)在試劑盒的使用手冊中列出包被量。行業(yè)中通常使用的包被量是200µl。如果你的試劑盒也是這樣,那么制造商可能會(huì)建議使用300µl洗滌液進(jìn)行洗滌,以便清潔整個(gè)反應(yīng)孔的壁。一般來說,洗滌量越高,則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。

第二個(gè)影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的量。當(dāng)然,洗滌次數(shù)越多,背景越低。然而,太多次的洗滌會(huì)降低信號強(qiáng)度,使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過,ELISA板的制造商會(huì)對洗滌次數(shù)提出建議。一般而言,制造商包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板,必須優(yōu)化洗滌次數(shù)??刂葡礈炝亢拖礈齑螖?shù)的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說,96孔板的每個(gè)孔能容納330至460 µl。不過,有些自動(dòng)化洗板機(jī)可設(shè)置程序,分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個(gè)量的洗滌液,比如1 ml。它是如何做到的呢?其實(shí)很簡單,就是在分液的同時(shí)打開吸液功能。換句話說,隨著分液器分配更多的液體,抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量,但不會(huì)溢出到其他孔中。

另外,還有一些參數(shù)會(huì)影響洗滌步驟的效果。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置,這兩者都能調(diào)整,以降低背景(殘留量)和差異。殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體,它們會(huì)增加背景信號。殘留量越小,殘留液體越少,轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少。吸液高度會(huì)明顯影響殘留量;如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大,那就會(huì)讓殘留量急劇增加。反之,如果洗滌吸頭壓著反應(yīng)孔底部,那么也會(huì)使吸液效率降低,殘留量增加。目前的洗板機(jī)一般使用兩種類型的洗頭:剛性和浮動(dòng)。浮動(dòng)洗頭中的吸頭可在洗滌過程中自由上下移動(dòng),而剛性洗頭則固定在適當(dāng)?shù)奈恢?。使用剛性洗頭的洗滌操作在優(yōu)化起來更為復(fù)雜,因?yàn)槟阈枰浅W屑?xì)地調(diào)整吸液高度。如果你們實(shí)驗(yàn)室使用幾種不同的板,那可能會(huì)很耗時(shí)。在使用浮動(dòng)洗頭時(shí),吸頭會(huì)降到反應(yīng)孔的底部。調(diào)整高度就不是很重要,因此洗頭會(huì)下降到底部。抽吸的位置也對殘留量有著重要影響;如果每個(gè)孔只使用一個(gè)抽吸點(diǎn)(這很常見,因?yàn)楦欤?,那么抽吸的位置需要?yōu)化。*的位置取決于洗頭的性狀,但它幾乎不在反應(yīng)孔的中間,即使這是所有洗頭zui常見的默認(rèn)位置。一般來說,*位置在孔中間與孔壁之間的某處。反應(yīng)孔的形狀也會(huì)影響殘留量。C形底(平底圓角)的微孔板一般會(huì)比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。如果沒有自動(dòng)洗板機(jī),采用手工洗滌,那么也需要注意幾點(diǎn)。使用8道或12道微量移液器,采用倒吸的方法進(jìn)行洗滌;不同廠家的洗液不宜相互混用。洗板時(shí)需保證微孔板平放,將洗滌液注滿各孔,但盡量避免漏液溢液,以每孔300 µl為宜;板洗次數(shù)一般為3次,要保證洗板的浸泡時(shí)間,每次浸泡時(shí)間一般為30-60 秒;盡量減少洗液殘留量,*每次洗板后進(jìn)行拍板,并及時(shí)更換吸水紙,避免吸水紙的碎屑粘到反應(yīng)孔內(nèi)。

大鼠CD44分子(CD44)ELISA Kit看起來很簡單,但是在實(shí)際操作過程中,也不能掉以輕心,還是應(yīng)該仔細(xì)檢查洗滌步驟,才能獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。


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