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大鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA Kit

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大鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA Kit上海素爾生物科技有限公司提供,1-2個工作日發(fā)貨,提供免費代測服務(wù),收到標本起一周內(nèi)提供原始數(shù)據(jù)和zui終數(shù)據(jù),提供ELISA各種樣本收集、處理、保存方法,歡迎您致電咨詢庫存狀態(tài),售后說明等。

詳細信息 在線詢價

大鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA Kit上海素爾生物為您傾情供應(yīng),**技術(shù),嚴格工藝流程,*抗體/抗原,嚴格QC檢測后方可出庫,請放心購買!致電:,! 

中文名稱:Rat anti-Thyroid-Peroxidase antibody,TPO-Ab ELISA Kit

英文名稱:大鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA Kit

儲存溫度::-20℃(較長時間不用時);2-8℃(頻繁使用時)

有效期:6個月

產(chǎn)品供應(yīng)商:上海素爾生物科技有限公司

1-2個工作日發(fā)貨,提供免費代測服務(wù),收到標本起一周內(nèi)提供原始數(shù)據(jù)和zui終數(shù)據(jù)

ELISA各種樣本收集、處理、保存方法

1. 血清標本收集、處理、保存方法:

用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標本,全血標本室溫放置1-2 h或4℃過夜,然后4℃、3000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。

2. 血漿標本收集、處理、保存方法:

根據(jù)樣本要求選擇EDTA或*或枸緣酸鈉作為抗凝劑,用含抗凝劑的*或離心管采集血液標本,室溫混合20 min左右,然后4℃、3000 rpm/min離心20 min,小心收集上清即為血漿。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。

3. 尿液標本收集、處理、保存方法:

用干凈容器收集尿液,4℃、3000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復(fù)凍融。

4. 唾液標本收集、處理、保存方法:

用干凈離心管收集唾液,4℃、3000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復(fù)凍融。

細胞標本收集、處理、保存方法:

(1)細胞培養(yǎng)上清

 取細胞培養(yǎng)上清到干凈離心管中,4℃、3000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復(fù)凍融。

細胞裂解液

收集細胞培養(yǎng)液,4℃、3000 rpm/min離心20 min,棄去上清,用預(yù)冷的PBS(0.01M,PH 7.4)洗滌三次。加入適量的預(yù)冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通過反復(fù)凍融,使細胞充分裂解。然后4℃、10000 rpm/min離心20 min,除去細胞碎片,取上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復(fù)凍融。

6. 植物標本收集、處理、保存方法:

取適量大小組織塊(一般0.2-0.5 g),用預(yù)冷的PBS緩沖液(0.01M,PH 7.4)漂洗三次,濾紙拭干水分。準確稱重,放入勻漿管中,加入4倍體積的勻漿介質(zhì)(0.05 mol/L Tris-HCl,pH 7.4 PBS緩沖液)于勻漿管中,冰水浴條件下,剪碎組織塊,手工勻漿或機器勻漿,制成勻漿液。4℃、10000 rpm/min離心20 min,取上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復(fù)凍融。

7. 糞便標本收集、處理、保存方法:

采集時用干凈的竹簽挑取糞便樣本到離心管中,向離心管中加入適量PBS緩沖液(0.01M,PH 7.4),攪拌均勻。然后4℃、10000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復(fù)凍融。

8. 組織標本收集、處理、保存方法:

將組織樣本用PBS緩沖液(0.01M,PH 7.4)沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。將組織塊稱重,記錄后剪碎(碎塊盡量?。?。將組織按一定的比例(通常組織重量:PBS體積=1:9)加入預(yù)冷的PBS緩沖液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)中勻漿,勻漿時置于冰上。吸取勻漿液到離心管中,4℃、10000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復(fù)凍融。

大鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA Kit

1.ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完, 板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,*使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

試劑盒靈敏度、精密度、穩(wěn)定性

1. 靈敏度:有二層含義,1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的zui低量的能力;2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。 

2. 特異性:常用交叉反應(yīng)率表示。其越高說明特異性越好。 

3. 精密度:ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV,其值應(yīng)小于15%;定量試劑應(yīng)同時考察線性范圍

4. 穩(wěn)定性:試劑在規(guī)定條件下能儲存的時間,一般采用破壞性試驗即將試劑存放于37℃保存,定期測定其靈敏度,特異性和精密度等指標,直到其質(zhì)量指標開始下降為止,通常認為37℃每穩(wěn)定一天相當于4-10℃保存一個半月。 

5. 簡便性:指在不影響試劑的前三項指標的前題下,實驗和測定步驟越少越好,在定性試驗中結(jié)果判斷簡單明了,定量試驗結(jié)果計算也應(yīng)簡單。

6. 安全性:指試劑對操作者和環(huán)境安全無害無傳染性。 

7. 經(jīng)濟性:試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進步降低成本而市場價格比較合理。 

試劑評價:需要有的確證方法確證的樣品進行檢測,一般實驗室不易取得此類樣品,每新購進一次試劑評價也很麻煩。可以通過間接的回收實驗對試劑進行選擇

ELISA試劑盒常見問題及分析

問題分析

若試驗效果不好,請及時對顯色結(jié)果拍照,保留未用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后我公司為你解決問題。同時您也可以參考以下資料:

問題描述

可能原因

相應(yīng)對策

標準曲線梯度差

吸液或加液不準

檢查移液器及吸頭

標準品稀釋不正確

稀釋標準品時,反復(fù)吹打,確保*混勻

洗滌不*

保證洗滌時間和洗滌次數(shù)及每孔的加液量

顯色很弱或無色

孵育時間太短

保證充足的孵育時間

實驗溫度不正確

使用*的實驗溫度

試劑提及不夠或漏加

檢查洗液及加液過程,保證所有試劑按順序足量添加

稀釋不正確

讀數(shù)數(shù)值低

酶標儀設(shè)置不正確

在酶標儀上檢查波長及濾光片設(shè)置

提前打開酶標儀預(yù)熱

變異系數(shù)大

加液不正確

檢查加液情況

背景值高

檢測抗體的工作濃度

使用*的稀釋倍數(shù)

酶標板洗滌不*

重新閱讀操作手冊,保證清洗*;如果用自動洗板機,請檢查所有的出口是否有堵塞

洗液有污染

配置新鮮的洗液

靈敏度低

ELISA試劑盒保存

按照說明書要求保存相關(guān)試劑

讀數(shù)前未終止

OD讀數(shù)前應(yīng)在每孔中加入終止液

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*個主要的參數(shù)是洗滌量。自動洗板機會分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景,那么不要猶豫,將洗滌量調(diào)為高,是比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌不到,從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。ELISA板的制造商通常會在試劑盒的使用手冊中列出包被量。行業(yè)中通常使用的包被量是200µl。如果你的試劑盒也是這樣,那么制造商可能會建議使用300µl洗滌液進行洗滌,以便清潔整個反應(yīng)孔的壁。一般來說,洗滌量越高,則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。

第二個影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的量。當然,洗滌次數(shù)越多,背景越低。然而,太多次的洗滌會降低信號強度,使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過,ELISA板的制造商會對洗滌次數(shù)提出建議。一般而言,制造商包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板,必須優(yōu)化洗滌次數(shù)??刂葡礈炝亢拖礈齑螖?shù)的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說,96孔板的每個孔能容納330至460 µl。不過,有些自動化洗板機可設(shè)置程序,分配遠遠超出這個量的洗滌液,比如1 ml。它是如何做到的呢?其實很簡單,就是在分液的同時打開吸液功能。換句話說,隨著分液器分配更多的液體,抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量,但不會溢出到其他孔中。

另外,還有一些參數(shù)會影響洗滌步驟的效果。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置,這兩者都能調(diào)整,以降低背景(殘留量)和差異。殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體,它們會增加背景信號。殘留量越小,殘留液體越少,轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少。吸液高度會明顯影響殘留量;如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大,那就會讓殘留量急劇增加。反之,如果洗滌吸頭壓著反應(yīng)孔底部,那么也會使吸液效率降低,殘留量增加。目前的洗板機一般使用兩種類型的洗頭:剛性和浮動。浮動洗頭中的吸頭可在洗滌過程中自由上下移動,而剛性洗頭則固定在適當?shù)奈恢谩J褂脛傂韵搭^的洗滌操作在優(yōu)化起來更為復(fù)雜,因為你需要非常仔細地調(diào)整吸液高度。如果你們實驗室使用幾種不同的板,那可能會很耗時。在使用浮動洗頭時,吸頭會降到反應(yīng)孔的底部。調(diào)整高度就不是很重要,因此洗頭會下降到底部。抽吸的位置也對殘留量有著重要影響;如果每個孔只使用一個抽吸點(這很常見,因為更快),那么抽吸的位置需要優(yōu)化。*的位置取決于洗頭的性狀,但它幾乎不在反應(yīng)孔的中間,即使這是所有洗頭zui常見的默認位置。一般來說,*位置在孔中間與孔壁之間的某處。反應(yīng)孔的形狀也會影響殘留量。C形底(平底圓角)的微孔板一般會比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。如果沒有自動洗板機,采用手工洗滌,那么也需要注意幾點。使用8道或12道微量移液器,采用倒吸的方法進行洗滌;不同廠家的洗液不宜相互混用。洗板時需保證微孔板平放,將洗滌液注滿各孔,但盡量避免漏液溢液,以每孔300 µl為宜;板洗次數(shù)一般為3次,要保證洗板的浸泡時間,每次浸泡時間一般為30-60 秒;盡量減少洗液殘留量,*每次洗板后進行拍板,并及時更換吸水紙,避免吸水紙的碎屑粘到反應(yīng)孔內(nèi)。

大鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA Kit看起來很簡單,但是在實際操作過程中,也不能掉以輕心,還是應(yīng)該仔細檢查洗滌步驟,才能獲得準確的結(jié)果。


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