扇貝毒素-2CRM-PTX2-b標準品是一種經(jīng)認證的校正液,用于分析方法的開發(fā)和PTX 2的準確定量。CRM-PTX2-b的濃度使其適合于制備液相色譜(LC)和液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)儀器校準的稀釋液系列,也適用于貝類對照樣品的回收實驗。
扇貝毒素-2CRM-PTX2-b標準品是新西蘭Cawthron研究所從浮游植物水華中分離到的一種植物。2001年2月初,這些浮游植物在離新西蘭布勒灣海岸3-4公里的地方被凈化,并按照前面的描述[2]進行了一系列色譜步驟的凈化。用純化的PTX 2在CDs0H(~4mm)中溶解制得原液。然后用定量NMR[5]測定了該原液中PTX 2的濃度,然后將PTX 2原液準確地稀釋在經(jīng)氣處理的高純甲醇中,制成終容為2 L的PTX 2原液。該溶液與Teflon攪拌棒和磁混合器混合,在氬氣條件下冷卻于冰浴中。阿利古特被分配到琥珀玻璃安瓿和火焰密封在Argonle下,然后被標記,包裝,并立即轉移到長期儲存在-80℃。每個安瓿含有大約0.5毫升的溶液。
扇貝毒素, 特別是 扇貝毒素-2, 主要由海洋甲藻中的 鰭藻屬 (Dinophysis spp.) 產(chǎn) 生 , 如倒卵形鰭藻 (Dinophysis fortii)、漸尖鰭藻(D. acuminata)、尖銳鰭 藻(D. acuta)、具尾鰭藻(D. caudata)、勇士鰭藻(D. miles)等 (Suzuki et al, 2009; Reguera et al, 2012; Nielsen et al, 2013; Tong et al, 2015)。但由于鰭藻的混 合營養(yǎng)特性, 即鰭藻的生長和繁殖需要三級食物鏈 [ 鰭藻—紅色中縊蟲 (Mesodinium rubrum) —隱藻 (Geminigera cryophila)]來完成(Park et al, 2006), 這 為從大規(guī)模培養(yǎng)的鰭藻中提取 扇貝毒素-2帶來一定的困 難。因此, 國際上一般是通過大量收集濃縮野外海水 樣品或染毒貝類來獲取 PTX2 標準品的制備原料。這樣 的工藝不僅制備過程復雜且工序繁瑣, 更重要的是原 料來源極不穩(wěn)定, 無法滿足常規(guī)監(jiān)管及應急需要。
因 此, 有研究以上述三級食物鏈為實驗手段 (Gao et al, 2017), 成功大規(guī)模培養(yǎng)了來自中國大連海 域的漸尖鰭藻(DAYS01-E6 株), 為制備 扇貝毒素-2提供了 充足的原料。并在此基礎上, 重點研究了在純種鰭藻 細胞中提取、分離、HPLC 純化扇貝毒素-2的標準化方法, 同時采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)進 行定量檢測, 為建立高效快速的 PTX2 標準物質(zhì)研制 方法奠定基礎。
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