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Rat/Mouse PINP EIA【樣本要求】：

采用血清或血漿 (EDTA 或肝素) 樣本。樣本收集后應盡快分離，長期儲存需置于-20℃下，避免樣本反復凍融。整個實驗應使用相同的樣本類型。

Rat/Mouse PINP EIA【操作步驟】：

1）加入50μl校準品、質控品于相應的酶標板MICROPLATE微孔內，每個做雙孔。

2）加入5μl樣本和45μl樣本稀釋液SAMPDIL于相應的酶標板MICROPLATE微孔內，，每個做雙孔。

注：上述每一步操作應在15分鐘內完成以減少誤差。

3）采用多道移液器移取50ml PINP生物素PINP BIOTIN加入至每個微孔內。

4）蓋上板蓋在酶標板振蕩器（500-700rpm）上于18-30℃下孵育1小時。

5）用稀釋好的沖洗緩沖液洗板3次。

a) 自動洗板：設置洗板機分配每孔至少300μl沖洗液。重復洗3次。

b) 手工洗板：迅速顛倒倒出孔內物。每孔加入250μl沖洗液。再重復洗板2次。

在進入下一步之前，于吸水紙上用力拍打倒置的板以去除多余的沖洗液。

6）用多道移液器向所有微孔內加入150μl的酶結合物ENZYMCONJ。

7）蓋上板蓋于18-30℃下孵育30分鐘。

8）重復步驟5）。

9）用多道移液器于每孔內加入150μl TMB底物SUBS。

注：TMB底物溶液易受到污染。僅移取檢測所需要的量，丟棄沒用完的TMB底物，請勿再倒回瓶內。

10）蓋上板蓋于18-30℃下孵育30分鐘。

11）用多道移液器于每孔內加入50μl終止液HCL。

12）加入終止液后的30分鐘內在酶標儀450nm（參考650nm）波長處讀取吸光率。

【參考值（參考范圍）】

目前尚沒有明確的參考范圍，各實驗室應根據(jù)情況確定自己的范圍。

Rat/Mouse PINP EIA【儲存條件及有效期】:

試劑在2-8℃下保存可穩(wěn)定至所標示的有效期。

復溶的標準品（CAL），質控品（CTRL）在-20℃下可保存8周。復溶的PINP生物素（PINP BIOTIN）在2-8℃下可保存8 周。

未使用完的包被抗體的酶標板條應放回至有干燥劑的箔袋中，將箔袋折好并密封于塑料封口袋中，2-8℃下可保存8周。

沖洗液可在室溫下保存長達8周。
試劑可能變壞的現(xiàn)象：

1.任何一個試劑中有反常微粒子出現(xiàn)。

2.校準品0吸光率下降。

3.曲線范圍偏離正常位置。

Rat/Mouse PINP EIA【適用儀器】：

適用于具有450nm、650nm波長的所有全自動、半自動酶標儀。