根據上海古朵生物技術實驗室過程了解到,檢測實驗中標記蛋白在測定過程中,具有一定的優(yōu)點。這些優(yōu)點為我們做實驗提供便捷快速的服務流程,作為標記物一般用于兩個目的:
?、俚鞍讬z測:即標記物的引入使得能夠檢測細胞表達系統(tǒng)中的標記蛋白,從而可對蛋白的功能、蛋白質在細胞的定位以及相互作用和生化活性進行研究;
②蛋白純化:即選擇一種可以與某種固相化配體結合的標記物,從而可以從細胞抽提物中批量純化蛋白。
標記蛋白具有許多優(yōu)點。原則上,該方法為檢測各種細胞成分中感興趣的蛋白提供廠新的手段。
?、偃绻_放閱讀框已經被克隆化,但是由于蛋白是新發(fā)現的,或者由于蛋白免疫原性較弱, 目前尚沒有針對該蛋白產物的抗體時,此標記技術具有重要的應用價值。隨著基因組的研究,由基因工程進入蛋白工程,標記技術顯得越來越重要。
②標記物可用于免疫沉淀試驗,由于抗標記物抗體的高度特異性,可以檢測結合在標記蛋白上的其他感興趣的目的蛋白。
?、壑灰邆溥m當的載體,標記蛋白可在任何細胞中進行表達;例如,相同的標記蛋白既可在細菌中表達,又可在昆蟲細胞系統(tǒng)中表達。
4標記技術可用于純化表達的蛋白,其特點是由于洗脫方法非常溫和,可以純化活性蛋白或蛋白復合物。
?、萦捎跇擞浳锊皇翘烊坏鞍装被嵝蛄械墓逃胁糠?,與標記物結合的試劑在進行蛋白提純過程中,對蛋白功能產生影響的可能性較小。
?、抟驗槊總€標記物是*的,有可能在同一細胞表達系統(tǒng)中同時表達多種標記物以研究蛋白質之間的相互作用或進行共定位(colocalization)。也可以使用多種標記物對同一蛋白或蛋白復合物進行純化,如按順序地使用2種標記物純化蛋白質時,可取得較好的效果。
?、邩擞浳锏亩ㄎ惶匦砸约芭c其他分子的相互作用,可通過穩(wěn)定轉染細胞中的表達進行監(jiān)測。標記物用于細胞染色和免疫印跡中檢測蛋白,對區(qū)分內源性的未標記蛋白和外源性蛋白效果較好。
隨著標記物技術的廣泛應用,已出現了范圍越來越廣泛的商品化產品,極大地推動了該技術的發(fā)展。表位作圖和新的標志蛋白以及蛋白和配體相互作用研究的成功,導致了大量新的標記系統(tǒng)不斷出現,然而目前還沒有適用于各種研究所需的標記物。在某些研究工作中,有必要使用多種不同的標記物,以證明標記物是否對蛋白活性產生影響
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