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【中國儀器網(wǎng) 使用手冊】熒光光譜技術(shù)是一種重要的光電檢測技術(shù)，特別是在物質(zhì)種類檢測中有著重要的應(yīng)用。它是對輻射能激發(fā)出的輻射強(qiáng)度進(jìn)行定量分析的發(fā)射光譜分析方法。物體經(jīng)過叫短波長的光照射后輻射出較長波長的光，這種光就是熒光，常見的日光燈的發(fā)光原理就是物質(zhì)吸收較短波長的光(紫外光)能量輻射出較長波長的光(可將光)的現(xiàn)象。
熒光光譜檢測技術(shù)原理
通常條件下，分子處于單重態(tài)的基態(tài)。分子受到紫外至紅外激勵的光子入射作用后，分子得到受激而引起電子能級的躍遷或振動和轉(zhuǎn)動能級的躍遷，分子受激后，處于電子激發(fā)的單重態(tài)的某種振動激發(fā)態(tài)( v ≠0)的分子或通過內(nèi)部轉(zhuǎn)換(Internal Conversion)和振動弛豫(Vibrational Relaxation)的非輻射，相繼發(fā)射熒光光子，回到電子基態(tài)得到熒光光譜；或通過激發(fā)單重態(tài)S1和激發(fā)三重態(tài)T1間的系間竄越(Intersystem Crossing)和振動弛豫至T1 ( v =0)，放出能量回到基態(tài)S0( v =0,1)得到熒光光譜的光子。
每一種物質(zhì)的分子或原子結(jié)構(gòu)是不一樣的，原子能級圖也就有不同的分布，原子能級躍遷也就會輻射出不同頻率的電磁波，就好比是人的指紋；每一種物質(zhì)的熒光效應(yīng)都有其特定的吸收光的波長和發(fā)射的熒光波。利用這一特性，可以定性鑒別物質(zhì)。研究分子的熒光光譜可為研究分子的微觀結(jié)構(gòu)、分子的構(gòu)象特點及變換情況提供幫助。
任何發(fā)熒光的分子都具有兩個特征光譜:熒光激發(fā)光譜(Excitation Spectrum)和熒光發(fā)射光譜(Emission Spectrum)。它們是熒光分析法進(jìn)行定性和定量分析的基本參數(shù)和依據(jù)，也是熒光光譜穩(wěn)態(tài)分析中的兩個基本特征。
熒光光譜檢測技術(shù)的特點
1.靈敏度高
熒光光譜檢測分析有著*的靈敏度。與常用的紫外—可見分光光度法比較，熒光是從入射光的直角方向檢測，即在相對的暗背景下檢測熒光的發(fā)射，而分光光度法是在人射光的直線方向檢測，即在亮背景下檢測暗線。因此一般熒光檢測分析的靈敏度要比分光光度法大2-3個數(shù)量級。例如，對易致癌的3, 4苯并花(3,4-Benzopyrene)的測定，若采用分光光度法，可檢測到10-6數(shù)量級；而采用熒光法可以達(dá)到10-9數(shù)量級。
2.選擇性強(qiáng)
熒光光譜包括激發(fā)光譜和發(fā)射光譜。所以熒光法既能依據(jù)特征發(fā)射，又可按照特征吸收，即用激發(fā)光譜來鑒定物質(zhì).假如某幾種物質(zhì)的發(fā)射光譜相似，可從激發(fā)光譜差異區(qū)分它們。若其吸收譜相同，則可用發(fā)射譜將其區(qū)別。因此，與只能得到待測物質(zhì)的特征吸收光譜的分光光度法相比，在鑒定物質(zhì)時，熒光法選擇性更強(qiáng)。
3.樣品用量少及方法簡便
由于靈敏度高，所以可大大減少樣品用量。特別在使用微量樣品時，效果明顯。例如用熒光法測定蛋白質(zhì)中*的含量時，只用40ug的樣品即可。另外熒光分析方法簡便，快速。
4.能提供較多的物理參數(shù)
可提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù).這些參數(shù)反映了分子的各種特性，且通過它們可以得到被研究分子的更多信息，這也是分光光度法不能相比的地方。
5. 環(huán)保特點
具備環(huán)保性，試驗后的樣品不污染環(huán)境，綠色檢測手段，將會獲得不斷推廣。
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