mRNA的瞬轉試劑,能在15-30后檢測到蛋白質合成
高轉染效率,針對原代細胞(例如,HUVEC和神經元)和干細胞的轉染試劑
快速mRNA導入技術,無胞吞作用及溶酶體的降解影響,不需要將基因導入細胞核內
低的細胞毒性
mRNA翻譯和降級研究
蛋白質生化研究:合成,折疊,處理,穩(wěn)定性,定位,降解
mRNA轉染進入原代細胞中不需要基因修飾的組織
采用RNA-only CRISPR/Cas技術進行基因組改造工程
全新的mRNA活細胞轉染試劑
15-30分鐘能完成mRNA轉染
不需要胞吞過程
不需要溶酶體降解
不需要將基因轉入細胞核中
專為成熟的(帶5’-Capped和poly-A的)mRNA優(yōu)化的轉染試劑
較好的生物兼容性和極低的生物毒性
不像傳統(tǒng)的脂質體轉染技術,膜融合不需要胞吞作用來釋放mRNA。內含mRNA的Fuse-it的脂載體,能夠快速簡單的與細胞膜相融合,并且將mRNA直接釋放如細胞質中。mRNA翻譯工作能夠立即進行,不會受到胞吞,溶酶體降解,或者有絲分裂的影響。
Fuse-it-mRNA具有令人難以置信的極速mRNA表達。在CHO-K1細胞中6個小時就具有接近99%的表達效率。而傳統(tǒng)的DNA轉染技術的效率低于10%。Fuse-it-RNA采用與細胞膜一致的電極,能夠有效的和多種細胞系進行膜融合。細胞系,無神經元,各種難以轉染的原代細胞都能采用膜融合轉染試劑將mRNA轉入細胞質中。Fuse-it-mRNA的膜融合技術能夠獲得快速高效的蛋白表達而不會對基因組造成影響。
Fuse-it-mRNA操作步驟非常容易掌握,因為融合試劑和mRNA的比例在各個實驗中都是固定的。試劑安全性好,沒有任何基因毒性,操作不需進行嚴格的生物防護。
對比傳統(tǒng)的脂質體轉染試劑,F(xiàn)use-It-mRNA僅僅需要5-20分鐘的孵育時間就能達到較大的mRNA轉染效率。不僅如此,僅用很少量的Fuse-it試劑就能獲得較大量的mRNA的轉染效率,而不需要額外使用化學藥劑,這樣對于一些敏感的細胞不會造成細胞毒性。
對比于傳統(tǒng)的脂質體轉染技術,F(xiàn)use-It-mRNA的膜融合方式不會傷害到細胞。如圖,六小時后,采用Fuse-It-mRNA轉染的人正常表皮角細胞(nHEK)已有 表達,而且細胞活性。而采用傳統(tǒng)方法時,六個小時后大量的細胞都已經死亡
2小時內就能在細胞中檢測到eGFP的蛋白表達,并且,eGFP表達量在持續(xù)上升并且能持續(xù)穩(wěn)定表達3天以上(90個小時)。
注意:采用成熟的mRNA能獲得理想的實驗結果(帶5’Capped和3’Poly-A的mRNA).
細胞類型
組織
孵育時間
mRNA表達效率
Primary Cells
Bone Marrow-derived Dendritic Cells (BMDCs) murine 20 min 70-80% Cortical Neurons (embry.) rat 5-15 min 70-90% Fibroblasts, foreskin human 10-15 min 60-80% Hepatocytes human 15-25 min 60-80% HUVEC human 10-20 min 50-70% Macrophages/Monocytes human 10-15 min 30-50% Myocytes (embry.) rat 15-25 min 40-60% Myofibroblasts (embry.) rat 15-20 min 30-50% N/TERT-1 (keratinocytes, immortalized by expression of TERT) human 10 min 80-90% nHEK, foreskin human 5-15 min 70-80% ZNS cells (unpurified) rat 5-15 min 80-99% Stem Cells
Cor.4U Myocytes (iPSC derived cardiomyocytes) human 10-20 min 80-99% Dopa.4U (iPSC derived dopaminergic neurons) human 5-10 min 70-90% iPSC human 10-20 min 70-90% Peri.4U (iPSC derived peripheral neurons) human 5-10 min 70-90% Cell Lines
A549 human 20-25 min 80-99% CHO-K1 hamster 15-20 min 80-99% HeLa human 15-20 min 70-90% HL-1
mouse 15-20 min 5-10% HT-1080 human 15-20 min 80-99% HUH-7 human 10-15 min 70-90% Jurkat human 1-2 min 20-50% L929 mouse 15-20 min 70-90% MCF-10A human 10-15 min 80-99% MCF-7 human 15-20 min 70-90% MDA-MB-231 human 10-15 min 70-90% MDCK dog 20-25 min 20-40% NIH-3T3 mouse 15-20 min 70-90% Rat1 rat 5-10 min 80-99% RAW 264.7 rat 15-20 min 50-70% THP-1 human 1-2 min 40-70%
Cortical Neurons (embry.) Organism: rat Incubation Time: 15 min mRNA eGFP
Fibroblasts, foreskin Organism: human Incubation Time: 15 min mRNA eGFP
Hepatocytes Organism: human Incubation Time: 25 min mRNA LifeAct-TagGFP2
THP-1 Organism: human Incubation Time: 1-2 min mRNA eGFP
HUVEC Organism: human Incubation Time: 20 min mRNA eGFP
HUVEC Organism: human Incubation Time: 20 min mRNA LifeAct-TagGFP2
Myocytes (embry.) Organism: rat Incubation Time: 25 min mRNA eGFP
Myofibroblasts (embry.) Organism: rat Incubation Time: 20 min mRNA eGFP
N/TERT-1
(keratinocytes, immortalized by expression of TERT)Organism: human Incubation Time: 10 min mRNA eGFP
ZNS cells (unpurified) Organism: rat Incubation Time: 15 min mRNA eGFP
nHEK, foreskin Organism: human Incubation Time: 20 min mRNA eGFP
nHEK, foreskin Organism: human Incubation Time: 20 min mRNA LifeAct-TagGFP2
Cor.4U Myocytes Organism: human Incubation Time: 20 min mRNA eGFP
Cor.4U Myocytes Organism: human Incubation Time: 20 min mRNA LifeAct-TagGFP2
Dopa.4U Organism: human Incubation Time: 10 min mRNA eGFP
iPSC Organism: human Incubation Time: 20 min mRNA eGFP
Peri.4U Organism: human Incubation Time: 10 min mRNA eGFP
CHO-K1 Organism: hamster Incubation Time: 20 min mRNA eGFP
CHO-K1 Organism: hamster Incubation Time: 20 min mRNA mCherry
HeLa Organism: human Incubation Time: 20 min mRNA eGFP
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