常見(jiàn)的媒介生物包括蚊、蠅、鼠、蟑螂、臭蟲(chóng)、虱子、跳蚤、螞蟻、蜱等。受氣候變化等影響,媒介生物增加了人畜共患病的傳播風(fēng)險(xiǎn),引起了全社會(huì)的重視和關(guān)注。媒介生物在長(zhǎng)期的宿主-病原體協(xié)同進(jìn)化中形成了特殊的生理生態(tài)適應(yīng)性和耐受性,由此為媒介生物傳染性疾病致病機(jī)制和防控的研究衍生出復(fù)雜的生命科學(xué)問(wèn)題。
高通量高分辨率媒介生物呼吸表型監(jiān)測(cè)系統(tǒng)是由的美國(guó)Sable Systems International動(dòng)物呼吸代謝測(cè)量公司生產(chǎn)的一款高通道(16、32通道可選)、高分辨率及自動(dòng)化的媒介生物呼吸表型監(jiān)測(cè)儀器,能夠監(jiān)測(cè)媒介個(gè)體或群體的實(shí)時(shí)氧氣消耗、二氧化碳產(chǎn)量、水汽代謝、活動(dòng)強(qiáng)度等參數(shù),可廣泛用于媒介生物從蟲(chóng)卵、幼體到成體的全齡段呼吸與活動(dòng)模式、代謝機(jī)理和控制策略研究,以應(yīng)對(duì)各類(lèi)潛在媒介生物疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)。
媒介生物呼吸表型系統(tǒng)作為媒介生物呼吸生理學(xué)研究控制與監(jiān)測(cè)方面的產(chǎn)品,主要具備以下特點(diǎn):
1.改變了傳統(tǒng)的單只個(gè)體的封閉或半封閉式測(cè)量模式,實(shí)現(xiàn)每個(gè)測(cè)量室都有實(shí)時(shí)氣流通過(guò)的開(kāi)放式測(cè)量,避免了測(cè)量時(shí)內(nèi)出現(xiàn)缺氧(hypoxia)或高碳酸血癥(hypercapnia),可一次測(cè)量多達(dá)16只個(gè)體。
2.真正測(cè)量媒介個(gè)體的呼吸模式和行為規(guī)律,使得科學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果值得信賴(lài),高效指導(dǎo)實(shí)踐應(yīng)用。
3.快至15秒就可以完成一只個(gè)體的代謝監(jiān)測(cè),這代表了目前技術(shù)的。
4.數(shù)據(jù)可以通過(guò)SD卡(支持32G)把帶時(shí)間標(biāo)簽的CSV格式直接導(dǎo)出或記錄到計(jì)算機(jī)進(jìn)一步分析。如下圖顯示:以果蠅為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,測(cè)試個(gè)體在10小時(shí)內(nèi)(N=16)多路復(fù)用系統(tǒng)監(jiān)測(cè)下的1秒活動(dòng)強(qiáng)度。從活動(dòng)強(qiáng)度值和二氧化碳產(chǎn)量(VCO2)曲線(xiàn)中可識(shí)別出實(shí)驗(yàn)對(duì)象休息和活動(dòng)時(shí)間的能力,以及VCO2隨活動(dòng)水平的變化。此外,曲線(xiàn)數(shù)據(jù)也顯示了個(gè)體活動(dòng)隨光周期變化的規(guī)律(引自/products/classic-line/maven_ft/)。
5. 可選配媒介生物行為(包括活動(dòng)軌跡、運(yùn)動(dòng)距離、取食傾向等2D或3D行為監(jiān)測(cè))、氣體(氧氣、二氧化碳、水汽以及其它可檢測(cè)氣體)、熱成像監(jiān)測(cè),以及珀?duì)栙N溫控等單元。
6. 的參考文獻(xiàn)案例,屬于前沿科技。
主要性能指標(biāo):
1.氣流流速:5毫升/分鐘-200毫升/分鐘,質(zhì)量流量計(jì),PID精確控制,精度為2%,或定制其它量程。
2.測(cè)量時(shí)間:15秒-3小時(shí)可程序化選擇;基線(xiàn)測(cè)量時(shí)間:15秒-3小時(shí)可程序化選擇。
3.氣壓測(cè)量:分辨率1Pa,精度0.05%。
4.光照水平:0.1-5000勒克斯。
5.溫度測(cè)量:0-50℃,分辨率0.01℃,精度±0.25℃。
6.模擬輸入:6個(gè)模擬輸入,16bit分辨率,-5至+5伏電壓信號(hào),可接SSI其它儀器或?qū)嶒?yàn)室其它氣體分析儀等。
7.雙通道高精度差分式氧氣分析測(cè)量?jī)x:燃料電池原理氧氣傳感器,氧氣濃度量程0-99%,精度0.1%,分辨率0.0001%,響應(yīng)時(shí)間小于7秒,24小時(shí)漂移<0.01%,溫度、壓力自動(dòng)補(bǔ)償;
8.超高精度二氧化碳分析測(cè)量?jī)x:用于測(cè)量微小昆蟲(chóng)(比如果蠅、蚊子等)或蜱螨類(lèi)微小動(dòng)物的呼吸代謝,可同時(shí)測(cè)量CO2濃度和H2O濃度;CO2量程0-3000ppm;準(zhǔn)確度<1%;分辨率0.01ppm;H2O量程0-60mmol/mol;準(zhǔn)確度1%;
9.二次抽樣單元:內(nèi)置氣泵、精密針閥、質(zhì)量流量計(jì),可用來(lái)給氣流樣本做二次抽樣,也可單獨(dú)作為氣源使用;流量范圍5-2000mL/min;精度為讀數(shù)的10%;分辨率1mL/min;具備2行顯示LCD顯示屏;帶0-5V BNC模擬信號(hào)輸出;數(shù)字輸出RS-232;供電12-15VDC,20-350mA,配交流電適配器;工作溫度:0-50℃,無(wú)冷凝;重量1.5kg;尺寸16cm×13cm×20cm;
產(chǎn)地:美國(guó)
應(yīng)用案例1
美蜱是落基山斑疹熱的主要媒介,由立克次體細(xì)菌(Rickettsiae)引起。落基山斑疹熱的癥狀包括高燒、發(fā)冷、肌肉酸痛和頭痛。在某些情況下,它通常在發(fā)燒開(kāi)始后2-4天發(fā)展可能成皮疹擴(kuò)散到四肢。這種疾病如果不及時(shí)治療,就會(huì)是致命的。另一種傳播疾病是土拉菌病,這是由土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis)引起的,可通過(guò)兔子、小鼠、松鼠和其他小動(dòng)物傳播,癥狀包括發(fā)熱、寒戰(zhàn)和淋巴結(jié)壓痛。蜱叮咬部位可能形成潰瘍。此外,美蜱會(huì)導(dǎo)致蜱麻痹,從而導(dǎo)致受影響的人出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸窘迫和肌肉無(wú)力。
作為強(qiáng)制性的吸血?jiǎng)游铮鼈兊拇蟛糠稚鼤r(shí)間都是在遠(yuǎn)離宿主的環(huán)境中度過(guò)無(wú)食物狀態(tài),因而成功存活對(duì)它們至關(guān)重要;然而學(xué)界對(duì)蜱蟲(chóng)饑餓耐受性的潛在生理和分子機(jī)制知之甚少。美國(guó)辛辛那提大學(xué)蜱蟲(chóng)教授Andrew J. Rosendale對(duì)雌性美國(guó)狗蜱的生物能量,轉(zhuǎn)錄組學(xué)和行為變化等進(jìn)行了研究,其中能量代謝實(shí)驗(yàn)通過(guò)SSI高分辨率呼吸代謝系統(tǒng)監(jiān)測(cè)CO2產(chǎn)量。蜱蟲(chóng)因?yàn)榇x率較低,在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,每只蜱蟲(chóng)放置在200微升的呼吸室中,推氣的氣流設(shè)置在30毫升/分鐘,從呼吸室出來(lái)的氣流進(jìn)入多通道氣路切換器,之后進(jìn)入高精度二氧化碳分析儀進(jìn)行氣體監(jiān)測(cè),并經(jīng)過(guò)軟件分析處理得到每個(gè)蜱蟲(chóng)不同饑餓時(shí)間后的代謝率(Rosendale A J et al, 2018)。
上圖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,雌性美蜱在饑餓期內(nèi)隨著饑餓時(shí)間延長(zhǎng)其代謝率呈2倍增加趨勢(shì)。在24小時(shí)的蜱蟲(chóng)活動(dòng)時(shí)間內(nèi),總體而言,饑餓影響了其活動(dòng)水平,饑餓36周的活動(dòng)水平顯著高于1、4和12周(A),這種差異主要由實(shí)驗(yàn)開(kāi)始早期的活動(dòng)量導(dǎo)致(B),但在實(shí)驗(yàn)后期無(wú)明顯差異(C);饑餓36周的狗蜱移動(dòng)到搜尋位置比剛飼喂個(gè)體少2.4倍時(shí)間(D)。研究認(rèn)為,隨著蜱蟲(chóng)饑餓持續(xù),它會(huì)利用糖原、脂質(zhì),以及生命后期的蛋白質(zhì)作為能量?jī)?chǔ)備,通過(guò)蛋白酶解和自噬促進(jìn)內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的調(diào)動(dòng);代謝率隨著饑餓持續(xù)增加,饑餓的蜱蟲(chóng)更有可能增加宿主搜尋行為。
應(yīng)用案例2
昆蟲(chóng)體內(nèi)可遺傳共生的微生物對(duì)其性狀和適應(yīng)性有廣泛的影響,包括操縱繁殖,提供營(yíng)養(yǎng),改變耐熱性和抵御病原體。微生物也可能改變宿主行為。在情況下,寄生微生物可以誘導(dǎo)增加傳播可能性的行為,例如將宿主引導(dǎo)到促進(jìn)傳播的棲息地。作為抗感染的免疫策略,受感染的宿主也可能改變自己的行為,包括尋求溫暖的溫度以誘發(fā)“行為發(fā)熱”或減少活動(dòng)并增加睡眠時(shí)間。這種行為改變對(duì)微生物傳播和宿主健康具有重要意義。
沃爾巴克氏體Wolbachia是一類(lèi)廣泛分布于陸生節(jié)肢動(dòng)物體內(nèi)的細(xì)胞內(nèi)共生菌,可通過(guò)雌性宿主的卵傳遞給子代,感染了大約一半的昆蟲(chóng)物種。加拿大蒙大拿大學(xué)生物科學(xué)系Michael T. J. Hague教授通過(guò)評(píng)估14個(gè)不同的沃爾巴克氏體菌株感染9種果蠅后的宿主運(yùn)動(dòng)活動(dòng)性影響來(lái)檢驗(yàn)沃爾巴克體改變宿主行為的假設(shè)(Michael et al., 2021)。在宿主運(yùn)動(dòng)活動(dòng)性測(cè)試實(shí)驗(yàn)中,使用16通道流通式呼吸測(cè)定和數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)(MAVEn,Sable Systems International)測(cè)量了實(shí)驗(yàn)果蠅的運(yùn)動(dòng)活動(dòng)。該系統(tǒng)含有16個(gè)2.4 ml的聚碳酸酯動(dòng)物測(cè)量室和一套活動(dòng)檢測(cè)器,其中活動(dòng)檢測(cè)器使用對(duì)果蠅不可見(jiàn)的紅外光以1 Hz采樣頻率來(lái)監(jiān)測(cè)每個(gè)測(cè)量室中的動(dòng)物活動(dòng)原始值并轉(zhuǎn)換為活動(dòng)指數(shù)差和(Absolute Difference Sums,ADS)。文中結(jié)果使用3小時(shí)內(nèi)的平均ADS作為每只果蠅的運(yùn)動(dòng)活動(dòng)的評(píng)估值。
實(shí)驗(yàn)中共測(cè)定了3104只蒼蠅的運(yùn)動(dòng)活性,結(jié)果見(jiàn)上圖(Figure 1. 每個(gè)基因型每個(gè)性別未感染和感染果蠅的活動(dòng)值)。
沃爾巴克氏體對(duì)六種宿主基因型的活動(dòng)性有顯著影響(上圖Figure 2),包括感染了A組和B組沃爾巴克氏體的果蠅宿主。另外,沃爾巴克氏體對(duì)宿主活動(dòng)的影響方向因基因型和性別而異。
研究結(jié)果支持了沃爾巴克氏體對(duì)宿主行為有廣泛影響的觀(guān)點(diǎn)。這些行為改變的適應(yīng)性后果對(duì)于理解宿主-共生體相互作用的進(jìn)化非常重要,包括沃爾巴克氏體如何在宿主種群中傳播。
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