糖酵解系列3磷酸甘油酸激酶PGK測試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格 : 100T/96S
測試方法：微量法
產(chǎn)品分類：糖酵解系列
產(chǎn)品品牌：mlBio/酶聯(lián)生物
產(chǎn)品包裝：液體盒裝
運輸條件：快遞包郵
應用范圍：僅供科研研究使用
保存條件：低溫避光保存
有效期：６個月
說明書 : 咨詢或電詢客服索取
供應商：上海酶聯(lián)生物科技有限公司
注 意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
糖酵解系列3磷酸甘油酸激酶PGK測試盒微量法
測定意義：
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關鍵酶，廣泛存在于動植物和微生物體內(nèi)，催化1，3-二磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變?yōu)?-磷酸甘油酸，產(chǎn)生1分子ATP，具有影響DNA復制和修補及刺激病毒RNA合成等生物學功能，廣泛應用于藥物靶標設計。
測定原理
3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產(chǎn)生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產(chǎn)生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm處的吸光度變化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、研缽、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）。
酶液提取:
① 總 PGK 酶提取:建議稱取約 0.1g 樣本,加入 1mL 提取液,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎 3s,間歇 7s,總時間 1min),然后 4℃,500g 離心 5min,取上清測定。
② 胞漿和葉綠體 PGK 酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 樣本,加入 1mL 提取液),冰浴勻漿后于 4℃,500g 離心 5min,棄沉淀,取上清在 4℃,8000g 離心 10min,取上清用于測定胞漿 PGK 酶活性,取沉淀加 1mL 提取液,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎 3s,間歇 7s,總時間 1min),然后 4℃, 500g 離心 5min,取上清測定葉綠體中 PGK 酶活性。建議測定總 PGK 酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的 PGK,則按照步驟②提取粗酶液。
3. 液體:直接檢測。
