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EHA101感受態(tài)細胞

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EHA101感受態(tài)細胞南京賽泓瑞生物在感受態(tài)細胞的研發(fā)方面,實力雄厚,擁有了克隆、表達、酵母和農(nóng)桿菌4大類,共計百余種感受態(tài)細胞。在電擊感受態(tài)方面,擁有了大腸桿菌 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞和農(nóng)桿菌電擊感受態(tài)種類,*提高了客戶在轉(zhuǎn)基因以及文庫構(gòu)建方面的成功率。

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EHA101農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞

EHA101 Chemically Competent Cell

產(chǎn)品編碼:                        保存條件: -80℃   
產(chǎn)品規(guī)格:

EHA10120×100 μl
pK7WGF2 (control vector)10 ng/μl            10 μl

                
EHA101農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞基因型:
C58 (rif R) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (kanR, strepR) Nopaline
EHA101農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞簡要說明:
 EHA101菌株為C58型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——*抗性基因rif,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pEHA101 (pTiBo542DT-DNA),此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。
pEHA101 (pTiBo542DT-DNA) Ti質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽:strepkan,賦予EHA101菌株*抗性和*抗性,適用于玉米、水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作,經(jīng)pK7WGF2質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達10cfu/μg DNA。

EHA101農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞操作說明:

  1.  -80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于冰上待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。
  2.  100 μl  感受態(tài)加1 μg(體積不大于10 μl)質(zhì)粒DNA,用手管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、28℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
  3.  加入700 μl無抗生素的LBYEB液體培養(yǎng)基,于28℃,200rpm振蕩培養(yǎng)2~3小時。

4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LBYEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天。
EHA101農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞注意事項:

  1.  加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。
  2.  混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作,轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。
  3.  *濃度不應(yīng)高于25 μg/ml,過高的*濃度不利于農(nóng)桿菌生長,會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計算轉(zhuǎn)化效率時所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板同時含有20 μg/ml rif則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2。

4. 培養(yǎng)基中加入*的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入*或*可防止Ti質(zhì)粒丟失,但*不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時不考慮*或*,Ti質(zhì)粒丟失的概率極低 (可以忽略)

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