*（酶聯(lián)免疫法）
elisa操作洗板過程常見問題及解答
1） 采用手工洗板， 孔與孔之間液體交叉。
2） 采用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。
3） 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
解決辦法：
1） 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后*在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
2） 合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。
手工洗板，每次加液后浸泡30s左右，保證洗板的效果。
通用名稱：*（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：Progesterone ELISA
產(chǎn)品貨號：RE52231
產(chǎn)品規(guī)格：96T
檢測樣本：血清和血漿
公司品牌：德國IBL
儲存條件：2-8℃
檢測方法：ELISA方法
預(yù)期用途：可用于人血清和血漿中孕酮的定量檢測
參考價格：詢價
供應(yīng)商家：深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司
孕酮ELISA檢測試劑盒預(yù)期用途
*可用于血清和血漿中孕酮的定量檢測。
孕酮簡介
孕酮是一種類固醇激素，含21個碳原子，在C-3上連有酮基，在C-4與在C-5之間為雙鍵連接。該類固醇激素是一種女性性激素，與雌激素共同在月經(jīng)周期中調(diào)節(jié)附屬的器官，它對于胚細(xì)胞著床前的子宮內(nèi)膜增生狀態(tài)和維持孕期是特別重要的。在非孕期婦女懷孕的胎盤成為主要來源。極少數(shù)來源于兩性的腎上腺皮質(zhì)。孕酮在循環(huán)血中主要與皮質(zhì)類固醇結(jié)合蛋白(CBG)，性激素結(jié)合蛋白(SHBG)和白蛋白結(jié)合，僅有循環(huán)總濃度的2-10%是游離激素。根據(jù)月經(jīng)循環(huán)周期血孕酮濃度范圍很寬，在卵泡期可以低于1ng/ml(3。2nmol/L)，在黃體期達(dá)到10-20ng/ml(32-64nmol/L)。在排卵后4-7天達(dá)到蕞高水平保持4-6天，在月經(jīng)開始前24小時降至排卵前的水平，因為孕酮的升高和降低與卵巢卵泡和黃體的活動相對應(yīng)，因此血漿孕酮的測定在臨床上常用來證明排卵和非孕婦女的黃體功能正常。假如排卵沒有發(fā)生，黃體則沒有生成進(jìn)而孕酮升高的循環(huán)也不能見到，異常的孕酮分泌與經(jīng)前期緊張子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)和黃體不全有關(guān)。孕酮濃度不僅個體之間有差異，而且同一個人每天甚至每個小時都會不同，一般的在婦科內(nèi)分泌紊亂或異常妊娠為了恰當(dāng)?shù)慕忉尣∫蜻B續(xù)測定比單個測定更有意義。在孕期孕通更多的有胎盤產(chǎn)生，血漿水平在這個時期穩(wěn)定在200ng/ml的水平。
實驗輔助所需材料（試劑盒不提供）
●酶標(biāo)儀
●校準(zhǔn)的移液器
●吸水紙
●去離子水
孕酮ELISA檢測試劑盒儲存條件
*可在2-8℃下保存至有效期，不要使用過期的試劑，開封的試劑和微孔板都應(yīng)貯存在2-8℃，微孔板密封袋一旦打開，必須立即重新密封保存，開封的試劑按上述貯存方法可保存2個月。
*檢測原理
*采用的是競爭酶免法，樣品中未知量的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競爭性結(jié)合包被在包被孔中的抗體結(jié)合位點。溫育后洗板以終止競爭反應(yīng)，樣本中孕酮的量與結(jié)合酶聯(lián)物的量成反比，加入底物液后，溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與樣品抗原的量成反比。
*組成成分
●1×12×8——MTP——微孔板，微孔中包被了抗孕酮抗體（多抗）
●7×1ml——CAL A-G——標(biāo)準(zhǔn)品A-G，0; 0.3; 1.25; 2.5; 5; 15; 40ng/ml即用，0.03%Proclin300+0.005%硫酸*作為防腐劑
●1×25ml——ENZCONJ CONC——酶聯(lián)物，即用，HRP標(biāo)記的孕酮含0.03%Proclin300，0.015%BND，0.01%MIT作為防腐劑
●1×25ml——TMB SUBS——底物液，即用，內(nèi)含TMB
●1×14ml——TMB STOP——終止液，即用，0.5M的H2SO4
●1×30ml——WASHBUF CONC——洗滌液，40倍濃縮
*檢測步驟
注意：洗板步驟是否規(guī)范直接影響著試驗的靈敏度和精確度
●將實驗所需板條固定在板架上
●加25ul的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本于相應(yīng)孔內(nèi)
●室溫下溫育5分鐘
●每孔加200ul的酶聯(lián)物，充分混合10秒，這一步驟中的充分混勻很重要
●室溫下溫育60分鐘
●棄去孔內(nèi)反應(yīng)液，每孔加400ul的洗滌液洗板3次，吸水紙上拍干
●每孔加200ul的底物液
●室溫下溫育15分鐘
●每孔加100ul的終止液
●加終止液10分鐘內(nèi)，酶標(biāo)儀上讀數(shù)
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