類(lèi)胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3測(cè)定試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附法)
ELISA操作加樣過(guò)程常見(jiàn)問(wèn)題及解答
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
- 其他樣本的處理不當(dāng),導(dǎo)致加樣不準(zhǔn);
- 加樣時(shí),不同標(biāo)準(zhǔn)品或樣本不更換槍頭;
4)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí));
5)加樣尤其是加底物液和終止液時(shí),順序不*,導(dǎo)致樣本顯色時(shí)間不*。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放 1-2 小時(shí)后,再用 3000rmp 離心 15 分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合 5-10 次,放置一段時(shí)間后,3000rpm 離心 15 分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在 2-8℃ 冰箱中,若要貯存,則置于-20℃ 的低溫冰箱內(nèi)。
2) 若樣本不是常規(guī)樣本,應(yīng)按照不同樣本的處理方法先行處理樣本,終使用清澈的樣本進(jìn)行檢測(cè);(詳見(jiàn)我公司常用樣本處理技術(shù)文章)
3)加樣時(shí),不同的標(biāo)準(zhǔn)品,質(zhì)控品和樣本分別使用不同的槍頭,避免交叉污染
加樣后及時(shí)放入孵箱;標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作;
5) 加酶或底物液,終止液時(shí)按照前后*的順序加樣,保證每個(gè)樣本反應(yīng)的時(shí)間*。為了縮短反應(yīng)時(shí)間,可采用多道移液器進(jìn)行。
通用名稱(chēng):類(lèi)胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3測(cè)定試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附法)
英文名稱(chēng):IGFBP-3 ELISA
公司品牌:德國(guó)DRG
產(chǎn)品貨號(hào):EIA5409
產(chǎn)品規(guī)格:96T
檢測(cè)樣本:血清
儲(chǔ)存條件:2-8℃
檢測(cè)方法:ELISA
預(yù)期用途:用于體外定量測(cè)定人血清中胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3的含量
供應(yīng)商家:深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司
類(lèi)胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3ELISA試劑盒產(chǎn)品規(guī)格
96T
類(lèi)胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3ELISA試劑盒預(yù)期用途
IGFBP-3 試劑盒用于體外定量測(cè)定人血清中胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3(IGFBP-3)的含量。
IGFBP-3 前言簡(jiǎn)介
胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)系統(tǒng)是正常體內(nèi)生長(zhǎng)和再生的主要調(diào)節(jié)因子,影響細(xì)胞增殖,分化和細(xì)胞凋亡。 此外,IGF-系統(tǒng)似乎改變胰島素敏感性和*性葡萄糖代謝。 后,許多流行病學(xué),實(shí)驗(yàn)和臨床資料表明,IGF-系統(tǒng)也涉及幾種常見(jiàn)癌癥的發(fā)展以及常見(jiàn)疾病如動(dòng)脈粥樣硬化和2型糖尿病等。
IGF家族由一系列密切相關(guān)的多肽組成,其包括兩個(gè)主要促進(jìn)生長(zhǎng)的多肽,IGF-I和IGF-II,6種特異性高親和力IGF結(jié)合蛋白(IGFBP-1至-6)和一個(gè)大的非IGF結(jié)合糖蛋白,“酸不穩(wěn)定亞單位”(ALS)。
IGFBP-3是較豐富的IGF結(jié)合蛋白,占健康人循環(huán)IGF結(jié)合能力的75%以上。 IGFBP-3與IGFBP-5共享功能特性,因?yàn)閮煞N肽都能與ALS和IGF-I或-II的形成高分子量約150千道爾頓的三元復(fù)合物。 然而,IGFBP-5循環(huán)濃度比IGFBP-3低得多,而在健康受試者中,三元復(fù)合物攜帶多達(dá)90%的IGFBP-3但只有約50%的IGFBP-5。
初IGFBP被認(rèn)為是IGF-載體蛋白,穩(wěn)定血漿IGF水平并控制IGF從循環(huán)中流出至血管外隔室。此外,人們認(rèn)為 IGFBP復(fù)合IGF在生物學(xué)上或多或少無(wú)活性,被剝奪了與IGF-1受體相互作用的能力。但是,很快人們就發(fā)現(xiàn),在一些實(shí)驗(yàn)設(shè)置中,IGFBP激活而不是抑制IGF-I介導(dǎo)的作用,因此,IGFBP通常被稱(chēng)為IGF-1生物活性的調(diào)節(jié)劑。另外,大多數(shù)的IGFBP,特別是IGFBP-3,發(fā)揮著IGF-I和IGF-I受體的獨(dú)立作用,可能涉及位于細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的特定受體間的相互作用。例如,IGFBP-3現(xiàn)在被認(rèn)為是作為抗癌分子服務(wù)的,它可以明顯防止幾種常見(jiàn)的癌癥,同時(shí)IGFBP-3在培養(yǎng)的脂肪細(xì)胞中對(duì)胰島素信號(hào)的傳導(dǎo)作用也被提出。
三元復(fù)合物的轉(zhuǎn)換非常緩慢,一天中IGFBP-3的血漿濃度始終保持穩(wěn)定,而不受短期營(yíng)養(yǎng)變化的影響。 因此,IGFBP-3的水平可以由一個(gè)單獨(dú)測(cè) 量確定。 GH是IGFBP-3以及IGF-I和ALS的主要調(diào)節(jié)因子,因此,三種多肽水平在青春期生*間增加,其后隨著年齡的增長(zhǎng)逐漸下降。 在兒童中,IGFBP-3已顯示與24小時(shí)GH分泌相關(guān),因此,IGFBP-3可能對(duì)兒童GH缺陷的診斷有幫助。
IGFBP-3 試劑盒檢測(cè)原理
GFBP3-ELISA是固相酶擴(kuò)增敏感性對(duì)微孔板進(jìn)行的免疫測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)品和樣品與包被的捕獲單克隆抗體(MAb 1)和用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的單克隆抗體(MAb 2)反應(yīng)。經(jīng)過(guò)孵育形成一個(gè)三明治結(jié)構(gòu):包被的MAb 1 - -人IGFBP3--MAb 2-HRP,洗滌微孔板以除去未結(jié)合的酶標(biāo)記抗體。通過(guò)顯色測(cè)量結(jié)合的酶標(biāo)記抗體反應(yīng)。加入顯色溶液(TMB)并孵育。添加終止液終止反應(yīng),然后在適當(dāng)波長(zhǎng)下讀取微孔板。被測(cè)物含量的顯色程度與人IGFBP3濃度成正比。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,樣品中IGFBP3濃度通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線可直接讀取。
IGFBP-3 試劑盒組成成分
| 成分 | 規(guī)格(96T) | 狀態(tài) |
PLATE | 96孔微量滴定板,包被了IGFBP3(單克隆抗體) | 96孔 | 即用型 |
AbHRP CONC | 酶標(biāo)記物濃縮液:HRP標(biāo)記的抗IGFBP3(單抗),含procin和牛血清白蛋白的檸檬酸緩沖液 | 0.5ml*1瓶 | 用酶標(biāo)記物緩沖液20倍稀釋 |
CONJ BUF | 酶標(biāo)記物緩沖液:含有牛血清白蛋白和百里酚的tris緩沖液 | 10ml*1瓶 | 即用型 |
CAL N | 標(biāo)準(zhǔn)品-N=1-5,含牛血清和百里酚的磷酸鹽緩沖液。 瓶體標(biāo)簽上有具體濃度。 標(biāo)準(zhǔn)品都是預(yù)稀釋過(guò)的,用稀釋液做0標(biāo)準(zhǔn)品。 | 5瓶?jī)龈煞?/td> | 加入1ml蒸餾水 |
DIL BUF | 稀釋液:含有牛血清,牛白蛋白和百里酚的磷酸鹽緩沖液 | 100ml*1瓶 | 即用型 |
ConTROL N | 質(zhì)控品N=1或2 ,含有人血清和百里酚,質(zhì)控品是預(yù)稀釋過(guò)的 | 2瓶?jī)龈煞?/td> | 加入1ml蒸餾水 |
WASH SOLN CONC | 洗滌液(tris-HCL) | 10ml*1瓶 | 蒸餾水200倍稀 釋?zhuān)ㄊ褂秒姶艛嚢杵鳎?/span> |
CHROM TMB | 底物液:TMB | 12ml*1瓶 | 即用型 |
STOP SOLN | 終止液:1.0N鹽酸 | 12ml*1瓶 | 即用型 |
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