Phos-tag™ * Phos-tag™ Biotin
磷酸化蛋白質(zhì)的免疫印跡分析
- 使用*標(biāo)記的Phos-tag™ 進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)
Phos-tag™ BTL-104和BTL-105為PVDF膜上的磷酸化蛋白檢測(cè)提供了一種敏感的方法。該方法需要用到鏈霉親和素標(biāo)記的辣根(HRP)和化學(xué)法官檢測(cè)試劑。
Phos-tag™ Biotin
Phos-tag™*用于免疫印跡分析的原理
Phos-tag Biotin的特點(diǎn)：
■ 對(duì)磷酸化蛋白的檢測(cè)極其靈敏 Phos-tag特異性結(jié)合與氨基酸基序列無關(guān)
■ 可適用于下游的抗體探針和質(zhì)譜分析等
■ 操作過程與常規(guī)使用辣根標(biāo)記抗體檢測(cè)近似
Phos-tag™ Biotin應(yīng)用：
（一）在PVDF 膜上檢測(cè)磷酸化蛋白
| 可精確檢測(cè)轉(zhuǎn)印在PVDF膜上的磷酸化蛋白至ng級(jí)水平，未檢測(cè)到相應(yīng)的去磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白的斑點(diǎn)。
免疫印跡檢測(cè)磷酸化蛋白——Phos-tag™ *。 |
摘自Eiji Kinoshita ,et al., Mol.Cel.Proteomics (2006) 5: 749
Phos-tag™ Biotin使用注意事項(xiàng)：
1. 在10μL溶劑E的Phos-tag BTL相對(duì)于1μL溶劑G的鏈霉親和素標(biāo)記辣根氧化酶而言，大大地過量。使用更小量 Phos-tag BTL (例如1μL 溶劑E) 和溶劑 G (1μL) 得到同樣的結(jié)果. 用戶可以調(diào)整溶劑E的體積以獲得同樣的靈敏度或者節(jié)省經(jīng)費(fèi)。如果溶劑E的體積減少，不需要調(diào)整zinc(II) 溶液的量(溶劑 F)。 按規(guī)范使用買了的磷酸化蛋白和鏈霉親和素標(biāo)記辣根氧化酶(GE Healthcare Bio-Sciences)，可以觀測(cè)到BTL-104和BTL-105在檢測(cè)效率上存在細(xì)微差別（由于間隔效應(yīng)）。
2. 如果膜沒有在溶劑C中*浸潤(rùn)，背景信號(hào)就會(huì)升高并形成斑點(diǎn)。更嚴(yán)重的是，無法觀測(cè)到蛋白質(zhì)信號(hào)。請(qǐng)確認(rèn)膜不會(huì)排斥溶劑C。
3. 強(qiáng)烈建議使用PVDF膜用于Phos-tag™ BTL方法。
Phos-tag™瓊脂糖 Phos-tag™ Agarose 相關(guān)產(chǎn)品
貨號(hào) | 廠商編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
301-93531 | BTL-104 | Phos-tag Biotin BTL-104 Phos-tag * | 10 mg |
308-93541 | BTL-105 | Phos-tag Biotin BTL-105 Phos-tag * | 10 mg |
308-97201 | BTL-111S1 | Phos-tag™ Biotin BTL-111 1 mM Aqueous Solution
Phos-tag™ * BTL-111 1 mM水溶液 | 0.1 ml |
考慮到更佳的溶解度，**次使用時(shí)，試用Phos-tag Biotin BTL-104。
可以觀測(cè)到BTL-104和BTL-105在檢測(cè)效率上存在細(xì)微差別（由于間隔效應(yīng)）。
BTL-111S1擁有更長(zhǎng)的親水性間隔, 因此比BTL-104有更高的靈敏度。
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