【儀器網(wǎng) 技術(shù)前沿】雙光子顯微鏡是一種結(jié)合了激光掃描共聚焦顯微鏡和雙光子激發(fā)技術(shù)一種新技術(shù)。為了不損傷細(xì)胞,雙光子顯微鏡使用了高能量鎖模脈沖激光器,因該激光器具有很高的峰值能量和很低的平均能量,其脈沖寬度只有100飛秒,而其頻率可以達(dá)到80至100兆赫。不僅如此,雙光子顯微鏡檢測(cè)效率高、易穿透標(biāo)本、對(duì)細(xì)胞毒性小、只在焦平面上才有光漂白和光毒性,這也使得顯微鏡在觀察厚標(biāo)本、活細(xì)胞、定點(diǎn)光漂白實(shí)驗(yàn)上起著積極的作用。
隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和社會(huì)的進(jìn)步,人們對(duì)儀器設(shè)備的各項(xiàng)性能提出了更高的要求,科技工作者也投入于研發(fā)新產(chǎn)品和新技術(shù)。
在國(guó)家自然科學(xué)基金委重大科研儀器研制專項(xiàng)“超高時(shí)空分辨微型化雙光子在體顯微
成像系統(tǒng)”的支持下,由北京大學(xué)分子醫(yī)學(xué)研究所牽頭,聯(lián)合北大信息科學(xué)技術(shù)學(xué)院
電子學(xué)系、工學(xué)院以及中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院等組成的跨學(xué)科團(tuán)隊(duì),推出了第二代微型化雙光子顯微鏡。2021年1月6日,研發(fā)團(tuán)隊(duì)在《Nature Methods》上發(fā)表了題為《Miniature two-photon microscopy for enlarged field-of-view, multi-plane, and long-term brain imaging》的文章。
文中報(bào)道了第二代微型化雙光子
熒光顯微鏡FHIRM-TPM 2.0,其成像視野是第一代微型化顯微鏡的7.8倍,同時(shí)儀器還具備了三維成像能力,能有效獲取小鼠在自由運(yùn)動(dòng)行為中大腦三維區(qū)域內(nèi)上千個(gè)神經(jīng)元清晰穩(wěn)定的動(dòng)態(tài)功能圖像,并且實(shí)現(xiàn)了針對(duì)同一批神經(jīng)元長(zhǎng)達(dá)一個(gè)月的追蹤記錄。通過(guò)對(duì)微型光學(xué)系統(tǒng)的重新設(shè)計(jì),F(xiàn)HIRM-TPM 2.0成像視野擴(kuò)大到了420×420平方微米,微型物鏡的工作距離擴(kuò)展至1毫米,有效實(shí)現(xiàn)了非侵入式成像。此外,第二代微型化雙光子熒光顯微鏡FHIRM-TPM 2.0可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求自由拆卸,新版微型化成像探頭也可整體即時(shí)拔插。
新款顯微鏡的適用性和實(shí)用性得到了有效的擴(kuò)大和提高,相信儀器的正式使用能夠幫助神經(jīng)科學(xué)家更自由地探索更多新的行為范式。
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