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生物顯微鏡關(guān)于組織塊的體積

點(diǎn)擊次數(shù):357 發(fā)布時(shí)間:2014-12-11

生物顯微鏡關(guān)于組織塊的體積

生物顯微鏡到目前為止,冰涼固定,冰凍超薄切片及冰凍干操是組織及細(xì)胞x線微區(qū)的常規(guī)方法。對(duì)該方法的細(xì)節(jié)做以下幾點(diǎn)說(shuō)明:

   生物顯微鏡有聚光鏡的顯微鏡則可將聚光鏡作上下移動(dòng)使其亮度適中,另外也可以改變可變光闡的孔徑以達(dá)到適中9b亮度。如果光線太陽(yáng)時(shí),則可將聚光鏡作適當(dāng)?shù)南蛏仙?,可變光鬧的孔徑作適當(dāng)?shù)姆糯蟆H绻饩€太強(qiáng)則可將聚光鏡作適當(dāng)?shù)南陆?,可交光閏的孔徑作適當(dāng)?shù)臏p小。假如在這種情況下還感到刺眼,那末可選用適當(dāng)?shù)臑V光片放置在聚光鏡下的托架上。這柞就能獲得使你滿意的亮度。當(dāng)然在調(diào)節(jié)聚光鏡的上下位置利可變光閱的孔徑大小以及選用適合的濾光片,那是要經(jīng)過(guò)一定時(shí)期的實(shí)踐而取得經(jīng)驗(yàn)的。

  生物顯微鏡一個(gè)非常重要的問(wèn)題是在取材和分離細(xì)胞過(guò)程,冰凍干燥和樹脂包埋(FD)后冰凍超簿團(tuán)片后,冰凍干燥后細(xì)跑各部位65元素成分含量中必須處理十分仔細(xì),絕不能損傷待觀察分析的細(xì)胞。因?yàn)樽鱴線微區(qū)分析不但步驟繁多,而且成本甚高,如果經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間及多步驟的處理后,所分析的細(xì)胞是受損傷的細(xì)胞或死細(xì)胞,得出錯(cuò)誤的結(jié)論是非常遺憾的。如經(jīng)過(guò)膠元酶處理分離出的心肌細(xì)胞有兩種形態(tài),一種是長(zhǎng)桿狀,另一種是圓形。后者是在細(xì)胞分離過(guò)程中受損傷的瀕死細(xì)胞。

  生物顯微鏡這兩種細(xì)胞中電解質(zhì)的含量及分布十分不同。圓形心肌細(xì)胞中Na甚高而K極低,線枝體中的ca濃度十分高。經(jīng)過(guò)與其它分析方法核對(duì),證明圓形細(xì)胞高Na低K及線粒體內(nèi)高ca是由于在細(xì)胞分離過(guò)程中細(xì)胞膜受損傷的結(jié)果。細(xì)胞及組織的冰涼固定方法往往是先采取淬冷固定,然后放入液氮中保存。淬冷固定對(duì)于保存的效果十分重要?;罴?xì)胞或新鮮組織中富含水分,當(dāng)淬冷時(shí)往往是細(xì)胞或組織與碎冷劑(特別是用液氮粹冷時(shí))直接接觸的部位先冷凍固定,因而形成一個(gè)“殼”,便妨礙了細(xì)胞的中心部位碎冷固定。因此在作x一線微區(qū)分析時(shí),常常發(fā)現(xiàn)較大的細(xì)胞的中心部位有冰晶存在。為了防止這種情況發(fā)生,便使用熔點(diǎn)比液氮高但低干一806c的物質(zhì)作碎冷劑。這類物質(zhì)很多,但zui易獲得,價(jià)格低廉的是濃態(tài)丙烷(沸點(diǎn)一42.120c,熔點(diǎn)一187.10c,分子量44.1),冷卻速度也zui快。但其缺點(diǎn)是易燃。

    生物顯微鏡可將肌纖維放在一特制的架上,使該肌纖維收縮達(dá)到某時(shí)相需要固定時(shí),立即啟動(dòng)噴咀,使液態(tài)丙烷向肌纖維噴射,使之淬冷固定。然后再將肌纖維連同架子取出投入液氮中。如果固定血細(xì)胞或分離的細(xì)胞,首先低速離心使細(xì)胞集中,將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到一個(gè)導(dǎo)熱性能良好的銀質(zhì)小管中、將該小管放入液態(tài)丙烷中獰冷固定。Hall實(shí)驗(yàn)室固定大鼠胰腺時(shí),先將兩鋼塊用液氦(或液氮)預(yù)冷,用鉗夾住兩銅塊將其放在胰腺前后,使姨腺淬冷固定。組織或細(xì)胞淬冷固定后轉(zhuǎn)移到液氮中可長(zhǎng)期保存。

    生物顯微鏡除目前zui推崇的冰凍超薄切片法外,在這里再介紹一種科學(xué)家們用過(guò)的沉積技術(shù)。在進(jìn)行分析前加入一種物質(zhì),使之與待分析的成份形成沉積物以固定它,然后分析該沉積物。例如,人們常用草酸鹽與焦銻酸鹽去沉積肌細(xì)胞中的ca。前者對(duì)胞漿中低濃度的ca敏感性不夠高;焦銻吱鹽的敏感性高些,可與腦漿中游離ca形成電子致密的沉積物,但焦銻酸鹽與鈉、錳、鋇、鐵也形成沉積物,特異性較差。標(biāo)本制備過(guò)程類似于普通透射電鏡超薄切片標(biāo)本的制備,不同之處在于固定前3%焦銻酸鉀(磷酸鹽緩沖液,pH7.6)固定6小時(shí),在染色的肌肉超薄切片上,在每個(gè)肌節(jié)的A帶和2帶的中線可見(jiàn)黑色沉淀物、再用未染色的切片做X射線微區(qū)分析。曾用二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸(DAB)去沉淀含血紅素的物質(zhì)等等。這種組化的沉淀反應(yīng)與x射線微區(qū)分橋聯(lián)合應(yīng)用在不具備冰凍超薄切片條件的實(shí)驗(yàn)室可考慮采用。根據(jù)待分析元素的峰高可做半定量

 

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