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分光光度計(jì)的基本原理補(bǔ)充

朗伯-比爾定律是比色分析的基本原理，這個(gè)定律是有色溶液對(duì)單色光的吸收程度與溶液及液層厚度間的定量關(guān)系。此定律是由朗伯定律和比爾定律歸納而得。

1.朗伯定律

一束單色光通過(guò)溶液后，由于溶液吸收了一部分光能，光的強(qiáng)度就要減弱：若溶液濃度不變，則溶液的厚度愈大（即光在溶液中所經(jīng)過(guò)的途徑愈長(zhǎng)），光的強(qiáng)度減低也愈顯著。

2.朗伯-比爾定律

如果同時(shí)考慮吸收層的厚度和溶液濃度對(duì)光吸收的影響，則必然將朗伯定律和比爾定律合并起來(lái)，吸光度與溶液的濃度和液層的厚度的乘積成正比，這就是朗伯-比爾定律。

分光光度計(jì)工作原理的限制性條件分光光度計(jì)的工作原理是是物質(zhì)對(duì)光的選擇吸收和瑯伯-比爾定律。

論瑯伯-比爾定律的限制性條件：

其一：通過(guò)溶液的光必須是平行的；

其二：通過(guò)溶液的光必須是單色光；

其三：待測(cè)溶液必須是純凈的、均勻的且濃度不宜過(guò)高，這是瑯伯-比爾定律首要的三個(gè)前提條件。

在實(shí)際的分光光度計(jì)的制造和使用過(guò)程中這三個(gè)條件是不可能達(dá)到的：

其一：因?yàn)楣馐侵本€傳播的，在分光光度計(jì)制造過(guò)程中，燈源發(fā)出的光是發(fā)散的，經(jīng)過(guò)聚焦鏡進(jìn)行聚焦等直到經(jīng)過(guò)溶液的整體過(guò)程中，光是不可能平行的。

其二：燈源發(fā)出的光是復(fù)合光，經(jīng)過(guò)狹縫，再經(jīng)過(guò)光柵分光等步驟，因?yàn)槭艿姜M縫和光柵本身的限制，光柵分光不可能達(dá)到純單色光。還有光度計(jì)的整體設(shè)計(jì)問題，光度計(jì)不可能沒有其它的雜光存在。

其三：用戶的溶液也不可能是純凈的，也會(huì)含有一些雜質(zhì)，這些對(duì)光度的吸收都會(huì)存在影響。

除以上三個(gè)方面的影響外，在實(shí)際的光度計(jì)應(yīng)用過(guò)程中還會(huì)存在其他因素的影響，例如：

1、經(jīng)過(guò)比色皿的光是否垂直；