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蜂王漿中10-羥基-2-葵烯酸液相色譜分析
點(diǎn)擊次數(shù)：985 發(fā)布時(shí)間：2014-11-2
蜂王漿中10-羥基-2-葵烯酸液相色譜分析
10-羥基-2-葵烯酸是科學(xué)家從蜂王漿中分離出一種有機(jī)酸，其分子式為C10H18O3，稱為10-羥基-2-癸烯酸（簡(jiǎn)稱HAD），是蜂王漿的重要成分之一，是一種特殊的不飽和有機(jī)酸，由于這種酸在自然界的其它物質(zhì)中沒(méi)有，只存在于蜂王漿中，所以也稱為王漿酸。10-羥基-2-癸烯酸含量是蜂王漿質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，一般含量在1.4%～4%之間，約占總脂肪酸的50%以上。分離出的純王漿酸呈白色晶體，在新鮮的蜂王漿中多以游離形式存在，性質(zhì)比較穩(wěn)定，有很好的殺菌、抑菌作用和抗癌、抗放射的功能。10-羥基-2-癸烯酸大大提高了蜂王漿的保健和醫(yī)療的效用。
一、試劑
1.本實(shí)驗(yàn)所用水為重蒸餾水；
2.甲醇：分析醇
3.乙醇：優(yōu)級(jí)純
4.內(nèi)標(biāo)物：對(duì)羥基苯甲酸甲酯含量99.0%；
5.10-HAD標(biāo)準(zhǔn)品：99.0%以上。使用前應(yīng)在放有濃硫酸的減壓干燥器內(nèi)減壓干燥24h;
6.10-HAD標(biāo)準(zhǔn)溶液：取干燥后的10-HAD標(biāo)準(zhǔn)品約25mg，精密稱定，加無(wú)水乙醇溶解并移入1000ml容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻。此溶液每毫升含內(nèi)標(biāo)物約0.65mg。
7.鹽酸（C=0.03mol/L）：量取0.1mol/L鹽酸100ml，加入200ml重蒸餾水中。
8.流動(dòng)相：甲醇55%+0.03mol/L鹽酸10%+水35%
二、儀器配置：
LC-3000液相色譜儀：配紫外檢測(cè)器，泵頭帶沖洗功能；
色譜處理工作軟件：能通過(guò)電腦鍵盤(pán)輸入LC-3000液相色譜儀所有參數(shù)，并能對(duì)柱溫箱參數(shù)設(shè)定；
色譜柱：C18，250*4.6*10 或250*4.6*5
柱溫箱；
離心機(jī)：不低于3000r/min，50ml
超聲波清洗機(jī)；
漩渦混合器；
分析天平：精度0.0001g
三、樣品處理
樣品解凍至室溫后用玻璃棒攪勻，取約0.5g，置于已稱定的50ml容量瓶中，精密稱定，加0.03mol/L鹽酸1ml和水2ml，置漩渦混合器上混合使樣品溶解，加無(wú)水乙醇30ml，邊加邊輕輕搖動(dòng)，再精密加入內(nèi)標(biāo)溶液10ml，并用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，立即置超聲波中超聲15min，或置漩渦混合器上振蕩15min，取出，在3000r/min下離心10min后測(cè)定。如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)放置在冰箱中冷藏待測(cè)。
四、色譜條件
測(cè)定波長(zhǎng)：210nm；柱溫：35度；流動(dòng)相流速：1ml/min。
五、校正因子測(cè)定
精密吸取10-HAD標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5、1、2、3、4、5ml至10ml容量瓶中。精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2ml，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取此溶液2ul，注入色譜儀，用峰面積比值計(jì)算，應(yīng)呈線性，求出校正因子F。
注：平行試驗(yàn)相對(duì)偏差不得超過(guò)2.0%
六、樣品測(cè)定
吸取樣品溶液4ul，注入色譜儀，按“內(nèi)標(biāo)法”定量。
七、計(jì)算
蜂王漿中10-羥基-2-葵烯酸含量按式中計(jì)算：
式中：
Ai Ms
X2=F×----×----×100
As Mi
X2---蜂王漿中10-羥基-2-葵烯酸含量%
F----校正因子
Ai---樣品中被測(cè)組分峰面積
As—試樣中內(nèi)標(biāo)物峰面積
Ms—內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量，單位為克（g）
Mi—樣品質(zhì)量，單位為克（g）