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技術(shù)文章

分光光度計(jì)的性能檢查

點(diǎn)擊次數(shù):586 發(fā)布時(shí)間:2014-11-22

(1)波長(zhǎng)校正:使用光電比色計(jì)或分光光度計(jì),在更換光源燈、重新安裝、搬運(yùn)或檢驗(yàn)后,以及儀器工作不正常時(shí),都要進(jìn)行波長(zhǎng)校正。就是正常工作的儀器,每隔一個(gè)月也要檢查一次波長(zhǎng),必要時(shí)進(jìn)行校正,這樣才能保證波長(zhǎng)讀數(shù)與通過(guò)樣品的波長(zhǎng)符合,保證儀器的zui大靈敏度。方法常用譜釹濾光片校正法,適用于721型儀可見(jiàn)光區(qū)的波長(zhǎng)校正,常以585nm或529nm處的吸收峰或T%為標(biāo)準(zhǔn)。鑒于721型儀器的出射光波長(zhǎng)較寬,不易將573nm和585nm的兩峰或兩谷分開(kāi),校正時(shí)易產(chǎn)生誤差,故推薦用529nm處的峰或谷為標(biāo)準(zhǔn)來(lái)進(jìn)行波長(zhǎng)校正。校正時(shí),將儀器按要求預(yù)熱。要求電源電壓穩(wěn)定。波長(zhǎng)度盤(pán)置580nm處,T%調(diào)至zui大,在比色杯處放一白紙條,觀察是否有光強(qiáng)均勻、邊沿?zé)o光暈或雜光的光斑,如不符合要求,可調(diào)節(jié)燈泡位置使其符合要求,是為波長(zhǎng)校正的粗調(diào)。再把靈敏度扭置于“1”(zui低檔),波長(zhǎng)度盤(pán)對(duì)準(zhǔn)529nm,電表機(jī)械零點(diǎn)為零,在光路空缺時(shí)調(diào)T%為100%T,并反復(fù)查零點(diǎn)和100%T穩(wěn)定情況。將譜釹濾光片插進(jìn)光路,慢慢旋轉(zhuǎn)波長(zhǎng)度盤(pán),找到透光率zui低的一點(diǎn)(向左右微旋波長(zhǎng)度盤(pán)時(shí),該點(diǎn)透光率值均增加),這一點(diǎn)即為波長(zhǎng)529nm。檢查波長(zhǎng)度盤(pán)的指示值是不是529nm,如指示值為534nm,此時(shí)波長(zhǎng)工誤差為5nm,超出規(guī)定(±1nm)必須進(jìn)行調(diào)整。

  調(diào)整方法:將波長(zhǎng)度盤(pán)對(duì)準(zhǔn)529nm,從光路取出譜釹濾光片,光路空缺時(shí)調(diào)電表指針到100%T,再將譜釹濾光片插進(jìn)光路。打開(kāi)儀器左側(cè)小蓋板,找到波長(zhǎng)校正螺絲(3個(gè)中左側(cè)柄長(zhǎng)的一個(gè));反時(shí)針?lè)较蛭⑽⒄{(diào)節(jié)(負(fù)誤差時(shí)順時(shí)針?lè)较颍?,使電表指針的指示T%為zui低。反復(fù)檢查波長(zhǎng)誤差情況,直到符合儀器技術(shù)指標(biāo)為止。蓋好左側(cè)小蓋板,校正結(jié)束。

  有些儀器如島津UV-260型雙光束分光光度計(jì),可使用氫燈或置譜釹濾光片于測(cè)定比色槽內(nèi),編進(jìn)濾工掃描程序后,儀器即可自動(dòng)地在一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行波長(zhǎng)校正。分光光度儀的光學(xué)系統(tǒng)密封在一個(gè)單元組件內(nèi),若發(fā)生故障,波長(zhǎng)不準(zhǔn),常須請(qǐng)制造商派專人修理。其它尚有譜線校正法、干涉濾光片校正法和有色溶液校正法等,可參考有關(guān)資料。

  (2)線性檢查:線性檢查包括儀器線性及測(cè)定方法線性兩個(gè)方面的檢查。線性誤差表現(xiàn)為溶液的濃度與吸光度不成線性關(guān)系,出現(xiàn)正偏離或負(fù)偏離的現(xiàn)象。這種偏離,按比耳定律的現(xiàn)象來(lái)自兩個(gè)方面:一是溶液本身不符合比耳定律,這種現(xiàn)象叫做化學(xué)偏離;二是儀器本身各種因素的影響,使吸光度測(cè)定值與濃度之間不成線性關(guān)系,這種現(xiàn)象叫儀器偏離。此處研究的是后者。儀器偏離的因素很多,如雜光、有限帶寬、檢測(cè)器噪聲、環(huán)境條件變化、波長(zhǎng)的變動(dòng)、比色杯的誤差、輻射光的非平行性、檢測(cè)器本身的非線性等。

  儀器線性檢查常用一種在一定波長(zhǎng)及一定濃度范圍內(nèi)確知其服從比耳定律的有色物質(zhì),配成不同濃度的溶液,來(lái)檢查儀器本身是否能如實(shí)地反映有色物質(zhì)的濃度變化。這種檢查方法與任何被測(cè)物質(zhì)呈色反應(yīng)等方法學(xué)上的題目無(wú)關(guān)。用測(cè)得的吸光度對(duì)濃度作圖,在理想情況下應(yīng)是一條直線。常用的方法是用0.8、1.6、2.4、4.0mg/L伊文藍(lán)濃度系列來(lái)檢查,波長(zhǎng)用610nm。

 ?。?)雜光(散光)檢查:在吸光度測(cè)定中,凡檢測(cè)器感受到的不需要的輻射都稱為雜光。雜光對(duì)吸光度測(cè)定法的正確性有嚴(yán)重的影響,但卻往往被忽視。雜光的來(lái)源有:①儀器本身的原因,如單色器的設(shè)計(jì)、光源的光譜分布、光學(xué)原件的老化程度、波帶寬度以及儀器內(nèi)部的反射及散射等;②室內(nèi)光線過(guò)強(qiáng)而漏進(jìn)儀器,儀器暗室蓋不嚴(yán);③樣品本身的原因,如樣品有無(wú)熒光、樣品的散射能力強(qiáng)弱等。

  雜光檢測(cè)方法:①紫外光區(qū)的雜光監(jiān)測(cè)可用10±0.1g/L的碘化納溶液,在240nm處測(cè)定的吸光度應(yīng)大于2.00。此外,也可用12g/L的氯化鉀溶液,在220nm處測(cè)其透光度,即為雜光量,一般應(yīng)小于1%T。以上測(cè)定均用石英杯,以蒸餾水校零。②在可見(jiàn)光區(qū)可使用譜釹濾光片或硫酸鎳法檢查。先用譜釹濾片校正波長(zhǎng),然后用黑紙片擋住比色杯光路(進(jìn)口儀器帶有比色杯樣玄色標(biāo)柱)之后調(diào)整0%T,再用空氣做空缺調(diào)100%T。插進(jìn)譜釹濾光片,在585nm處測(cè)定,其測(cè)定值即為雜光水平。

  (4)比色杯的質(zhì)量檢查:比色杯一般由玻璃、石英或熒石制成,光徑1.0或0.5cm,光線通過(guò)期有一部分光為空氣與玻璃接觸面的反射而損失(4%),另一部分(很少)為玻璃吸收。比色杯的質(zhì)量除其原料外,再就是玻璃的厚度均勻,上下一致,各杯彼此相配。廠家多以四個(gè)一套供給,且杯口上部外面標(biāo)有箭頭,箭頭對(duì)光源側(cè)使用。盡管如此,在使用前還是應(yīng)作質(zhì)量檢查。常用伊文藍(lán)法:將一定量的2.0mg/L的伊文藍(lán)溶液注進(jìn)比色杯中,比色杯內(nèi)液面應(yīng)相等。用一個(gè)比色杯作標(biāo)準(zhǔn),用紅色濾光片(波長(zhǎng)600~610nm),用水校零后將此杯的讀數(shù)正確調(diào)至50%T,接著讀取其余杯的透光度。透光度相差在±0.5%T范圍內(nèi)者為合格。

 ?。?)穩(wěn)定性檢查:檢查方法:將分光光度計(jì)及附件接于0.5kVA以上的可調(diào)變壓器,先調(diào)電壓為220V,波長(zhǎng)固定在650nm,在光路比色杯裝以空缺液,調(diào)讀數(shù)為90%T處,再將電壓升至230V及降至190V,觀察透光度的漂移值。若介于88.5%~91.5%T之間為合格。在電源電壓不變的條件下,在3分鐘內(nèi)其讀數(shù)漂移不應(yīng)超過(guò)標(biāo)尺上限值的±0.5%。

 ?。?)重復(fù)性檢查:在波長(zhǎng)、工作狀態(tài)、電源電壓、比色杯配套等合格的條件下,進(jìn)行重復(fù)檢查。在用交流電源供電時(shí),儀器對(duì)一種溶液重復(fù)測(cè)定的讀數(shù)值差應(yīng)小于或即是標(biāo)尺上限值的1%。試驗(yàn)方法:將分析純重絡(luò)酸鉀于120~150攝氏度烘干2小時(shí),干燥器中冷卻。精稱509.1mg于1000ml容量瓶中,以蒸餾水溶解并加至刻度,混勻(此液180mg/L鉻)。就用液為30、60、180mg鉻/L。取波長(zhǎng)440nm,將應(yīng)用液各濃度管連續(xù)測(cè)3~5次,各濃度管中zui大誤差小于1%T為合格。

 ?。?)靈敏度檢查:將重鉻酸鉀液配制成30和32.5mg鉻/L及120和122.5mg/L鉻的4種應(yīng)用液(濃度差兩組各為2.5mg/L鉻)。波長(zhǎng)440nm,以水校零點(diǎn),將上述應(yīng)用液連續(xù)測(cè)3次吸光度,兩組2.5mg/L鉻濃度差的吸光度值差都不小于0.01為合格。

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