1、制備采血的鱟要新鮮或用經(jīng)人工養(yǎng)殖幾天后的健康鱟,采血時血流必須通暢。采血量大,試劑質量也高,但不同季節(jié)鱟血的質量也有差異。
2、在制備TL的全過程中均須無菌操作,動作應輕,以防止細胞破裂。使用器具均須清洗干凈并去熱原。作者曾對器具做硅化與不硅化處理的比較,其結果發(fā)現(xiàn)器具硅化與否不影響靈敏度。因此,只要器具干凈并已去熱原即可以不硅化。
3、在抗凝劑方面,作者使用的茶-堿量較大,觀察發(fā)現(xiàn)其細胞形態(tài)均正常,在采血瓶中分散均勻,且發(fā)生聚集的時間后移。之后再用抗凝劑2洗1次,有利于將血藍蛋白除去。除茶-堿外,其他抗凝劑是否也可加大用量尚需探索。
4、氯化鈉一般用來配制抗凝劑與洗脫液,常用2.95%~3%的氯化鈉溶液,其濃度與海水濃度相當。作者曾觀察4%濃度的氯化鈉溶液對變形細胞的影響,隨著觀察時間的延長,3%濃度的氯化鈉溶液中的變形細胞逐漸破裂溶解,并在洗滌中形成小塊,而4%的氯化鈉溶液中的細胞仍然均勻分散。作者對兩種不同濃度氯化鈉制品的質量尚未進行深入的比較。
5、關于重組鱟試劑:PyroSmart NextGenTM(PSNG)重組鱟試劑是一種基因工程合成的細菌內毒素定量檢測試劑,PSNG鱟試劑完-全模擬了天然鱟試劑LAL的酶聯(lián)反應,包含重組C因子、重組B因子、重組凝固酶原,且剔除了容易引起假陽性的G因子,不依賴鱟血,滿足可持續(xù)發(fā)展的目標,可以應用動態(tài)顯色法進行測試和分析。
PSNG是一種靈敏而靈活的試劑,可用于USP、JP的細菌內毒素測試章節(jié)進行動態(tài)顯色法細菌內毒檢測,不需要更換方法和設備,操作簡便易行。
在PyrosKinetix®Flex細菌內毒素定量檢測系統(tǒng)及酶標儀上,PSNG和樣品可以按照50微升:200微升的比例使用,極大的節(jié)約試劑消耗。
【重組鱟試劑優(yōu)勢】
檢測便利:不需要更換方法和設備
快速高效:完成實驗僅需(10-30)分鐘
節(jié)約試劑:鱟試劑使用量僅需50微升
靈敏度高:靈敏度可達0.001EU/mL,實際可達0.0005EU/mL
特異性:PSNG不與(1,3)-β-D-葡聚糖發(fā)生反應,杜絕了假陽性結果。
藥典法規(guī)護航:USP、EP、JP、ChP藥典法規(guī)收錄
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