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ERM-AD623 BCR-ABL pDNA校準(zhǔn)旨在用于定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)分析的校準(zhǔn)，測(cè)量白血病患者cDNA樣本中的BCR-ABL1b3a2轉(zhuǎn)錄水平。ERM-AD623 旨在用于qPCR檢測(cè)，定量BCR-ABL1b3a2轉(zhuǎn)錄本與3個(gè)對(duì)照基因(CG)中的1個(gè)轉(zhuǎn)錄本相關(guān)：ABL1、BCR或葡萄糖醛酸酶(GUSB)?？梢允褂脦追N使用不同的探針/引物集或PCR儀器的qPCR檢測(cè)方法(見認(rèn)證報(bào)告[1]的附錄H)。ERM-AD623對(duì)BCR-ABL1b2a2轉(zhuǎn)錄本的定量的適用性必須由實(shí)驗(yàn)室來(lái)驗(yàn)證。ERM-AD623可直接用于cDNA樣本的常規(guī)分析，也可間接用于校準(zhǔn)內(nèi)部質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品。

材料描述

ERM-AD623融合基因BCR-ABL1是連接兩個(gè)基因(c-abl致癌基因1[ABL1]和斷點(diǎn)簇基因[BCR])的基因易位的結(jié)果，是慢性髓系白血病(CML)的主要原因。斷點(diǎn)可以發(fā)生在基因內(nèi)的不同位置，兩個(gè)主要轉(zhuǎn)錄本稱為b2a2和b3a2(將BCR的第13和第14外顯子分別與ABL1的第2外顯子連接)。BCR-ABL編碼一種構(gòu)成型活性酪氨。酸激酶，它是用酪氨。酸激酶抑制劑標(biāo)準(zhǔn)治療CML的靶向藥物。定期監(jiān)測(cè)患者外周血中BCR-ABL1轉(zhuǎn)錄水平對(duì)于評(píng)估[2]的治療療效至關(guān)重要。采用由RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄和qPCR組成的多步測(cè)量程序，如圖1所示，ERM-AD623用于定量血液樣本中的BCR-ABL轉(zhuǎn)錄水平。

材料處理

6個(gè)ERM-AD623 BCR-ABL pDNA校準(zhǔn)質(zhì)粒溶液在使用前應(yīng)保存在-20°C下。為了準(zhǔn)備可使用的溶液，小瓶的內(nèi)容物應(yīng)該*解凍，并通過翻轉(zhuǎn)小瓶幾次輕輕混合。一旦解凍，溶液zui多可在4°C下保存4周，或放在-20°C下。但是，這些溶液不應(yīng)通過超過10次的凍融循環(huán)。

質(zhì)粒溶液的認(rèn)證值及其相關(guān)的不確定度只有在遵守2µL證書上規(guī)定的最小樣品攝入量時(shí)才有效。ERM-AD623不能用于樣本攝入量較低的BCR-ABL轉(zhuǎn)錄本的可靠定量。特別是對(duì)于拷貝數(shù)濃度最.di的質(zhì)粒溶液(即ERM-AD623f)的測(cè)量結(jié)果，在2µL以下的樣品攝入量下觀察到泊松分布。關(guān)于qPCR測(cè)量的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建議已發(fā)表于[5]，并總結(jié)在表1中。

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