5.2.3 冰核菌種凍干
20世紀(jì)90年代初，朱紅等發(fā)表了冰核菌種凍干的研究。冰核細(xì)菌大量附生于植物表面，并在-2～-5℃以下具有很強(qiáng)的冰核作用，在人工降雨降雪、人工制冰和生物免疫學(xué)檢測(cè)方法中有很高的應(yīng)用價(jià)值。朱紅等人對(duì)冰核菌種的5種保存方法進(jìn)行了比較研究。其中IHM4菌株的實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表5-6。
表5-6數(shù)據(jù)表明，對(duì)于IHM4冰核菌種，考慮存活力和冰核活力兩個(gè)因素，冷凍干燥保存與滅菌水保存效果相當(dāng)。但凍干后更方便儲(chǔ)運(yùn)，而滅菌水保存更為經(jīng)濟(jì)。該項(xiàng)研究沒(méi)有給出具體的凍干工藝參數(shù)。
5.2.4 鼠疫菌種凍干
為長(zhǎng)期有效保存鼠疫菌種，使其不失原有的生物學(xué)特性，鄭星銘等早在1997年就進(jìn)行了鼠疫菌種的凍干研究，給出凍干工藝。活化的菌種接種于溶血赫氏瓊脂斜面，28℃培養(yǎng)40h。將培養(yǎng)后的菌種研磨分散于1.5mL滅菌脫脂牛乳中，再分裝在10支安甑中，每支約0.2mL、3~4mm高。為確保鼠疫菌種不被抽出，防止污染環(huán)境，每支安瓿的管口用滅菌脫脂棉松塞。將安瓿豎立在專用鋁盒內(nèi)，送入已經(jīng)降溫至-30℃的凍干箱內(nèi)預(yù)凍。預(yù)凍1h后，繼續(xù)降溫2h后達(dá)-55℃。開(kāi)啟真空泵，升華干燥。干燥后加熱升溫至30℃，維持4～6h。工藝曲線見(jiàn)圖5-4。菌種凍干后，放入帶有吸濕劑的干燥罐內(nèi)，抽真空后封口保存。鄭星銘的研究報(bào)告中強(qiáng)調(diào)，凍結(jié)溫度要低于牛乳的共晶點(diǎn)（-16℃）5～10℃，保證凍實(shí)。降溫速率為10～15℃/h。第一干燥階段除去90%以上的水分。第二干燥階段除去結(jié)合水，溫度相對(duì)要高，但不可高于30℃，以免影響制品的穩(wěn)定性和活性。
5.2.5 麻疹減毒疫苗凍干
麻疹病毒在液態(tài)下不穩(wěn)定。多年的研究表明，麻疹病毒加入保護(hù)劑凍干后，穩(wěn)定性明顯改善。徐斌等通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)研究了麻疹減毒活疫苗的凍干工藝。首先用電阻法測(cè)定麻疹減毒活疫苗的共晶點(diǎn)溫度為-26℃。設(shè)計(jì)的正交實(shí)驗(yàn)因素水平見(jiàn)表5-7。
注：升華干燥E2過(guò)程，制品的溫度始終控制在31℃以下。
實(shí)驗(yàn)研究中每次分裝1800支、0.6mL/支麻疹減毒活疫苗進(jìn)行凍干實(shí)驗(yàn)，然后對(duì)凍干制品進(jìn)行水分、滴度、熱穩(wěn)定性檢測(cè)，并計(jì)算干損率。實(shí)驗(yàn)研究的結(jié)果表明，優(yōu)化的麻疹減毒活疫苗凍干工藝參數(shù)列于表5-8。以優(yōu)化的麻疹減毒活疫苗凍干工藝凍干的制品成型良好，干損率平均為1.36%，穩(wěn)定性好，殘余水分在1.62%～1.67%之間。優(yōu)化的麻疹減毒活疫苗凍干工藝適合麻疹疫苗大規(guī)模生產(chǎn)。
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