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氨基酸衍生法數(shù)據(jù)大PK:OPA or 茚三酮,原來(lái)選它

閱讀:1060      發(fā)布時(shí)間:2022-6-15
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氨基酸是構(gòu)建生物機(jī)體的眾多生物活性大分子之一,是構(gòu)建細(xì)胞、修復(fù)組織的基礎(chǔ)材料。它被人體用于制造抗體蛋白、血紅蛋白、酶和激素以維持和調(diào)節(jié)新陳代謝,是一切生命之源。

由于氨基酸的重要性,合適可靠的檢測(cè)方案將成為評(píng)估食品、飼料、藥物及生理樣品中氨基酸指標(biāo)的重要選擇。

HPLC—柱后衍生法,50多年來(lái)作為氨基酸領(lǐng)域的重要檢測(cè)手段,因?yàn)槠涓咝У臏y(cè)試準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性,深受廣大用戶的信賴。

氨基酸檢測(cè)在藥物、食品、飼料中的主要應(yīng)用有

●   通過(guò)分析氨基酸組鑒定多膚和蛋白質(zhì);

●   原料藥和中間體中的雜質(zhì)和有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定;

●   藥物中單個(gè)或總氨基酸的定量, 包括復(fù)雜基質(zhì)中標(biāo)記物的測(cè)定;

●   重組蛋白生產(chǎn)過(guò)程的控制;

●   確定氨基酸組成也是保證食品和飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的必要條件;

●   用于產(chǎn)品質(zhì)量及過(guò)程監(jiān)測(cè)。



衍生方法介紹


Pickering Laboratories根據(jù)上述應(yīng)用的檢測(cè)對(duì)象的不同,將衍生方法分為OPA衍生法和茚三酮衍生法,兩種方法都可以與任何氨基酸陽(yáng)離子交換柱和洗脫液組合使用。其中我們稱為Trione ®的茚三酮試劑,也廣泛應(yīng)用于氨基酸分析儀中。

OPA法與茚三酮法區(qū)別見(jiàn)下表:


氨基酸衍生法

_

Trione®劑分析法

OPA劑分析法

衍生試劑


TlOO-預(yù)混試劑 ;自生產(chǎn)日期起計(jì)算, 4個(gè)月保質(zhì)期(950 ml/瓶)

TlOOC -預(yù)混試劑;自生產(chǎn)日期起計(jì)算, 4個(gè)月保質(zhì)期(950 mL/瓶)

T200 - 2部分試劑,混合后使用,從生產(chǎn)之日起12個(gè)月保質(zhì)期;4組/箱

(900mL/瓶)

OD104-氨基酸分析用OPA稀釋液;

O120-OPA試劑(5g/瓶)

3700-2000 -疏基化合物。(10g/瓶)

這三種產(chǎn)品都是用于氨基酸OPA分析法

適用樣品


一級(jí)和二級(jí)氨基酸

一級(jí)氨基酸

在與OPA反應(yīng)之前需要檢測(cè)二級(jí)氨基酸氧化步驟。使用氧化步驟時(shí),一級(jí)氨基酸的檢測(cè)靈敏度會(huì)有所降低。

檢測(cè)器

UV/VIS

FLD

儀器靈敏度

10 pmole (在色譜柱上)

2 pmole (在色譜柱上)

色譜柱&洗脫液

適用于任何陽(yáng)離子交換柱氨基酸分析法

與任何用于氨基酸分析的陽(yáng)離子交換柱配合使用

配置

單泵Ony×PCXI vector PCX+ 0.5 m L反應(yīng)器

單泵Ony×PCX/ vector PCX+ 0.15 ml反應(yīng)器。

*需要帶有0.5 mL和0.1 mL反應(yīng)器的雙泵OnyxPCX來(lái)檢測(cè)二級(jí)氨基酸。 在此模式下, 初級(jí)氨基酸的靈敏度會(huì)降低。


色譜柱的選擇

                               圖1:鈉柱氨基酸分析選擇


                            圖2:鋰柱氨基酸分析選擇


                                   圖3:氨基酸標(biāo)品


                                        圖4:豆粕樣品


                                 圖5:水解單克隆樣品


Pickering產(chǎn)品


完整解決方案

歐洲藥典8.0對(duì)于氨基酸的柱后衍生茚三酮法做了詳細(xì)的要求,藥典對(duì)于包括化學(xué)、 動(dòng)物、 人或草藥來(lái)源的活性物質(zhì)、賦形劑和制劑,順勢(shì)療法制劑,抗生素,制劑和容器等都有所要求。

Pickering Laboratories 將歐洲藥典作為測(cè)試依據(jù),為客戶提供完整的氨基酸分析解決方案。

                  Pickering 柱后衍生儀


解決方案包括Onyx PCX/Vector PCX 柱后衍生儀器、分析柱、保護(hù)柱、緩沖液和Trione ®茚三酮試劑。并且對(duì)方法進(jìn)行了優(yōu)化, 在符合藥典各項(xiàng)體系適宜性要求的同時(shí),提高了分析的靈敏度及分析效率。

                              Pickering全套試劑包

                        圖6:依據(jù)歐洲藥典8.0法測(cè)試氨基酸


關(guān)于Pickering Laboratories


美國(guó)Pickering Laboratories公司是僅有的專業(yè)提供人工測(cè)試體液和柱后衍生化學(xué)試劑、色譜柱、分析方法等柱后衍生分析整體解決方案的機(jī)構(gòu),其不斷創(chuàng)新及良好的信譽(yù)被眾多的美國(guó)政府機(jī)構(gòu)如EPA、ATF、FDA、AOAC和很多廠商所認(rèn)可。



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