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一.樣本采集和儲(chǔ)存

1、采便盒采集新鮮糞便樣本。固體約20g或稀便約20ml（約糞便盒的三分之一）

2、5天內(nèi)4℃保存，5天至1月內(nèi)-20℃保存，1月以上-70℃長(zhǎng)時(shí)間保存

二.提取程序

1、定量管螺紋一端插入糞便，使螺紋填滿，插入定量管中并擰緊，確保螺紋被填滿，（約13mg糞便）

2、若樣本為水樣，直接用移液槍吸取13ul（13mg）到定量管，若樣本為粘稠的膠狀便，建議采用電子天平稱量定量

3、擰開定量管另一端，加入650ul樣本提取液（1:50倍稀釋），渦旋震蕩5-10min，直到螺紋上糞便樣本*溶解

4、將震蕩好的萃取液從濾頭處擠出上清，滴入1.5ml EP管內(nèi)，取10ul加入到1500ul孵育緩沖液（150倍稀釋）

三. ELISA步驟

1、將試劑盒平衡至室溫

2、將96孔板清洗2遍，甩干（注意：洗后不能放置時(shí)間過長(zhǎng)；可不用洗板操作）

3、分別吸取100ul稀釋后的樣本、標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品

4、用封膜封板，置于水平搖床，18-28°C 孵育30-60分鐘，400轉(zhuǎn)/分鐘

5、清洗4遍

6、每孔均加入100ul酶結(jié)合物

7、用封膜封板，置于水平搖床上，18-28°C 孵育30-60分鐘，400轉(zhuǎn)/分鐘

8、清洗5遍，甩干

9、每孔均加入100ul TMB底物液

10、用封膜封板，置于水平搖床上，避光，18-28°C，孵育15分鐘，400轉(zhuǎn)/分鐘

11、每孔均加入100ul終止液終止

12、用酶標(biāo)儀在450 nm處讀數(shù)（5分鐘內(nèi)）

13、x軸使用濃度值30,90,300,900,1800ug/g，Y軸使用OD值，使用四參數(shù)擬合標(biāo)曲。根據(jù)Y值計(jì)算獲得樣本X值