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　　反硝化作用將陸地和水生態(tài)系統(tǒng)中的沉積物、水體、土壤、植被等氮庫(kù)中的氮轉(zhuǎn)化成氣態(tài)歸還到大氣圈的主要途徑
 

　　反硝化細(xì)菌主要通過(guò)誘導(dǎo)產(chǎn)生硝酸還原酶和呀硝酸還原酶對(duì)硝酸鹽和亞硝酸鹽進(jìn)行還原能消除污水中的氮，同時(shí)又消除了含氮的有害物質(zhì)。
 

　　是一類(lèi)兼性厭氧微生物，有分子態(tài)氧存在時(shí)可化解有機(jī)物，利用其作為終電子受體，無(wú)分子態(tài)氧存在下，反硝化菌利用硝酸鹽亞硝酸鹽作為電子受體，有機(jī)物作為碳源及電子供體提供能量。
 

　　有助于研究反硝化脫氮除鱗技術(shù)，減輕水體中氮磷污染及其恢復(fù)環(huán)境PH 的穩(wěn)定性，還可揭示其在富營(yíng)養(yǎng)化水體中脫氮除鱗性能提供理論依據(jù) 方法原理
 

　　反消化過(guò)程對(duì)于硝酸根離子消耗速率顯著大于土壤其他生物化學(xué)過(guò)程對(duì)硝酸根離子利用。因此通過(guò)適宜的培養(yǎng)條件下，測(cè)定介質(zhì)中硝酸根離子和亞硝酸根離子消失量，利用大可能計(jì)數(shù)法初步估計(jì)反硝化微生物數(shù)量。 設(shè)備及實(shí)驗(yàn)條件：
 

　　1)分析天平：度0.0001g
 

　　2)高壓蒸汽滅菌鍋
 

　　3)酒精燈
 

　　4)超凈工作臺(tái)
 

　　5)恒溫培養(yǎng)箱
 

　　6)鼓風(fēng)干燥箱
 

　　7)移液管：100-1000ul
 

　　試劑and操作步驟 試劑
 

　　1)奈氏試劑：2g dian化鉀溶于5ml蒸餾水。加入32gHgI2顆粒溶解飽和為止；將12.4gKOH溶于40ml蒸餾水中。將此溶液倒入HgI2溶液中，加水到100ml.
 

　　2)格里斯試劑：0.5g對(duì)氨基苯磺酸加到150ml20%稀乙酸溶液中；將1ga-萘胺加到20ml蒸餾水和150ml20%稀乙酸溶液中，混合兩液
 

　　3)二苯胺試劑：0.5g二苯胺溶于20ml蒸餾水以及100ml濃硫酸中 2
 

　　1)每支試管(1.8cmx18cm)中裝入10ml培養(yǎng)基(深層培養(yǎng)，造成厭氧條件，培養(yǎng)基成分及其含量見(jiàn)表6-1)在培養(yǎng)基倒放一小根玻璃管(杜氏發(fā)酵管)121攝氏度下滅菌30min 2)選取五個(gè)稀釋度(10^-7-10^-3) 沉積物懸液，每一稀釋度的懸液接種四支試管，每管接種1ml。另取四支培養(yǎng)基不接種懸液而接種無(wú)菌水作為對(duì)照。
 

　　3)將接種好的試管與28攝氏度培養(yǎng)4D后，檢查有無(wú)細(xì)菌，如有培養(yǎng)液會(huì)變渾濁甚至有氣泡出現(xiàn)
 

　　4)吸取1或2滴培養(yǎng)液于白瓷板孔中，加入1，2滴奈氏試劑后出現(xiàn)棕紅色或淺褐色沉淀表明培養(yǎng)基有氨產(chǎn)生。用格里斯試劑和二苯胺分別檢查是否有亞硝酸和硝酸的產(chǎn)生
 

　　5)對(duì)反硝化細(xì)菌進(jìn)一步分離和純化，可吸取培養(yǎng)液1ml到新鮮培養(yǎng)液中富集培養(yǎng)，必要時(shí)可反復(fù)兩次富集培養(yǎng)。吸取濃縮10倍的反硝化細(xì)菌培養(yǎng)液2ml，加入到經(jīng)紫外線(xiàn)消毒的硅膠板上，涂勻置于40攝氏度恒溫箱中干燥至平板表面無(wú)積水，然后將富集培養(yǎng)的樣品進(jìn)行懸液接種培養(yǎng)。14D后觀(guān)察菌落生長(zhǎng)的情況，并純化單菌落
 

　　6)如需鏡檢取無(wú)菌吸管一支，用手指壓緊瓶口，放入培養(yǎng)瓶底部，在松手，此時(shí)培養(yǎng)液會(huì)自動(dòng)吸入，取出后涂片，用革蘭氏染色后鏡檢，一般用酒石酸鉀鈉作為碳源的多位革蘭氏陰性菌 注意要點(diǎn)
 

　　試驗(yàn)中吸管培養(yǎng)皿在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前做滅菌處理
 

　　吸管每次吸取懸液時(shí)，在稀釋液中反復(fù)吸入吸出懸液3-5次以減少因管壁吸附而造成的誤差，使懸浮液進(jìn)一步分散 結(jié)果計(jì)算
 

　　每克干土菌落數(shù)=菌落平均數(shù)x稀釋倍數(shù)x20/干土所占百分比