測定總糖的經(jīng)典化學(xué)方法都是以其能被各種試劑氧化為基礎(chǔ)的。這些方法中,以各種根據(jù)斐林氏溶液的氧化作用的改進(jìn)法的應(yīng)用范圍廣。在這里我們主要給大家介紹蒽銅比色法。蒽銅比色法要求比色時(shí)糖液濃度在一定范圍內(nèi),但要求檢測液澄清,此外,在大多數(shù)情況下,測定要求不包括淀粉和糊精,這就要在測定前將淀粉,糊精去掉,這樣就使操作復(fù)雜化,限制了其廣泛應(yīng)用。
蒽銅的比色法
1.原理:
糖與硫酸反應(yīng)脫水生成羥甲基呋喃甲醛,生產(chǎn)物再與蒽銅縮合成蘭色化合物,其顏色深淺與溶液中糖的濃度成正比,可比色定量。
2.試劑
(1) 硫酸鋅溶液:溶解500g化學(xué)硫酸鋅于500ml水中
(2) K4Fe(CN)6·3H2O溶液:溶解10.6g化學(xué)K4Fe(CN)6·3H2O于100ml水中
(3) 0.2%蒽銅試劑:溶解蒽銅0.2g于100ml95%硫酸中,置棕色瓶中冷暗處保存
(4) 0.1%葡萄糖液:準(zhǔn)確稱干燥葡萄糖0.1000g 定容100ml
3.操作方法
(1) 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
(2) 100ml容量瓶編號(hào)
在恒溫水浴鍋中加熱6分鐘,取出冷卻→用1cm比色杯→610nm測定吸光度→作出以吸光度為橫坐標(biāo),糖液濃度為縱坐標(biāo)的準(zhǔn)
曲線
(3) 樣品測定
稱10g樣品→于100ml熱水加入500ml容量瓶中-加硫酸鋅5ml→沸水浴5分鐘→取出再搖動(dòng)下加K4Fe(CN)6·3H2O5ml,→冷卻→定容500ml→過濾→吸濾液25ml→于250ml容量瓶→定容250ml→取稀釋液1ml,于比色管中→加10ml蒽銅試劑→搖勻→恒溫水浴鍋中加熱6分鐘→冷卻→比色
試驗(yàn)注意
1,樣液必須清澈透明,加熱后不應(yīng)有蛋白質(zhì)沉淀
2,樣品顏色較深時(shí),可用活性炭脫色后再進(jìn)行測定
3,此法與所用的硫酸濃度和加熱時(shí)間有關(guān)
4,所取糖液濃度在1-2.5mg/100ml之間
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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