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    支原體常用培養(yǎng)基為PPLO,很多公司都有出售.但血清 (常用馬血清或豬血清)和抗生素(醋酸跎)你要自己加.你可以查查.還有改良的Frey's培養(yǎng)基，常用的微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)書上都可以查到的?？梢宰约号渲频摹Ｔ谝后w培養(yǎng)基中通常要加入酚紅做指示劑的，當(dāng)培養(yǎng)基由紅色變?yōu)辄S色時，即可判定支原體的生長程度。要強(qiáng)調(diào)一點(diǎn)，支原體的分離可能不太容易，那么要多盲傳幾代。液體培養(yǎng)基變黃后，在固體培養(yǎng)基上單克隆，以純化分離的菌。

    所有解脲，人型，肺炎，生殖道支原體培養(yǎng)基 ，均為液態(tài)，不知道homiao要分離哪種支原體，需要哪種支原體?

    1、培養(yǎng) ：支原體的培養(yǎng)37℃的生化培養(yǎng)箱即可，當(dāng)然，初次培養(yǎng)37℃，5%-10%co2的二氧化碳培養(yǎng)箱效果更好。其中，解脲支原體生長比較快，用我所培養(yǎng)基，接種量104- 105ccu，培養(yǎng)16-18h即可達(dá)到對數(shù)生長期。人型，肺炎，24-48h即可達(dá)到對數(shù)生長期。

    2、鑒定：主要靠菌落染色、生化反應(yīng)及特異性生長抑制試驗(yàn)等.

    (1)Dienes菌落染色　　Dienes染色液：　　美藍(lán) 2.5g　　天青-Ⅱ 1.5g 　　麥芽糖 10g 　　碳酸鈉 0.5g 　　蒸餾水 100ml

 染色時，直接吸染色液覆蓋菌落，1min后，用生理鹽水洗去染色液，低倍鏡下可見支原體菌落呈藍(lán)色，而其他菌菌落不著色。

    (2)生化反應(yīng)

    根據(jù)不同采樣部位及對底物的分解或者作為能源，可以鑒別不同支原體。

    解脲支原 分解尿素不分解精氨酸，生成NH3使培養(yǎng)基的ph升高，酚紅指示劑變紅。

    人型支原體分解L-精氨酸不分解尿素，生成NH3使PH值升高，酚紅指示劑變紅。

    肺炎和人型支原體分解葡萄糖，使pH降低，酚紅指示劑由紅變黃。

    (3)在含0.002%美藍(lán)的培養(yǎng)基中肺炎支原體能生長且將美藍(lán)還原而退色，其他口腔、唾液或發(fā)酵支原體均被抑制生長，此法可鑒定肺炎支原體。

    (4)分子生物學(xué)鑒定

    由于支原體的基因文庫已建立，通過pcr擴(kuò)增和基因探針技術(shù)可以對支原體進(jìn)行鑒定。

    如果要自己配制培養(yǎng)基，現(xiàn)提供幾種配方：

    基礎(chǔ)培養(yǎng)基：Hayflick培養(yǎng)基(PPLO培養(yǎng)基)，牛心粉 50g 蛋白胨 10g 氯化鈉 5g 加14g瓊脂粉為固體培養(yǎng)基

    (1) 肺炎支原體培養(yǎng)基

    基礎(chǔ)培養(yǎng)基 70ml　　牛血清 (滅活) 20ml　　25%的酵母浸液 10ml　　50%葡萄糖 1-2ml 0.4　　酚紅 0.5ml　　制霉素 0.001g　　青霉素 10萬IU　　pH 7.8

    (2)人型支原體培養(yǎng)基

    基礎(chǔ)培養(yǎng)基 70ml　　馬血清 20ml 25%的酵母浸液 10ml　　30%L-精氨酸 0.33ml　　0.4%酚紅 0.5ml　　制霉素 0.001g　　青霉素 10萬IU　　pH 6.3

    (3)解脲支原體培養(yǎng)基

    基礎(chǔ)培養(yǎng)基 70ml　　馬血清 20ml　　25%的酵母浸液 10ml　　30%尿素0.33ml　　0.4%酚紅 0.5ml　　制霉素 0.001g　　青霉素 10萬IU 　　pH 6.0

注：由于支原體能在人工培養(yǎng)基上生長，但是營養(yǎng)要求較高，需要提供膽 固醇和酵母才能生長。以上配方中，馬(牛).血清提供膽固醇，酵母浸液提供酵母。