細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)技術(shù) 

概述 

細(xì)菌的培養(yǎng)技術(shù)是微生物實(shí)驗(yàn)中基本技術(shù)之一。大多數(shù)細(xì)菌均可用人工方法培養(yǎng)，只有將細(xì)菌  培養(yǎng)出來(lái)才能對(duì)它進(jìn)行研究和鑒定。 

知識(shí)點(diǎn)導(dǎo)航 

一.培養(yǎng)基的種類 

培養(yǎng)基（culture medium）是細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需要的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的人工制品。適宜的培養(yǎng)基能使細(xì)菌在體外迅速生長(zhǎng)繁殖，便于對(duì)細(xì)菌進(jìn)行分離和鑒別。可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、厭氧菌用培養(yǎng)基和特殊培養(yǎng)基。 

        （一）基礎(chǔ)培養(yǎng)基只含有細(xì)菌生長(zhǎng)所需的基本營(yíng)養(yǎng)成分，應(yīng)用廣泛，為制備多種培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，常見的有肉湯培養(yǎng)基、瓊脂培養(yǎng)基。 

        （二）營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有機(jī)物，可供營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌生長(zhǎng)需要或增菌用。如結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)基中添加雞蛋、馬鈴薯、甘油等。 

        （三）選擇培養(yǎng)基利用不同種類細(xì)菌對(duì)化學(xué)物質(zhì)的敏感性不同而制成，使分離菌大量繁殖而抑制其它細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中含有的抑制劑能抑制非目的菌生長(zhǎng)或使其生長(zhǎng)不佳，有利于目的菌的檢出和識(shí)別。選擇培養(yǎng)基多為固體平板，用于從標(biāo)本中分離某些特定的細(xì)菌。 

        （四）鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加有某些特定成分，如糖、醇類和指示劑等，用于檢查細(xì)菌的各種生化反應(yīng)，以資鑒別和鑒定細(xì)菌。 

        （五）厭氧菌用培養(yǎng)基專性厭氧菌須在無(wú)氧條件下才能生長(zhǎng)，故需在培養(yǎng)基中加入半胱氨酸、硫乙醇酸鈉等還原劑，降低培養(yǎng)基中氧化還原電勢(shì)，并應(yīng)與外界空氣隔絕，使培養(yǎng)基本身為無(wú)氧的環(huán)境。 

        （六）特殊培養(yǎng)基為某些需要在特殊條件下才能生長(zhǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)之用。如高滲鹽增菌培養(yǎng)基、高滲糖增菌培養(yǎng)基、改良 Kagan氏培養(yǎng)基等。 

二.培養(yǎng)基的制備 

制備一般培養(yǎng)基的主要過(guò)程基本相似，包括調(diào)配、溶化、調(diào)整 pH、過(guò)濾、分裝、滅菌及檢定和保存。 三.細(xì)菌檢驗(yàn)室的注意事項(xiàng)及無(wú)菌技術(shù)  細(xì)菌培養(yǎng)必須隨時(shí)為防止污染和病原菌的擴(kuò)散而進(jìn)行操作，即無(wú)菌操作。

細(xì)菌檢驗(yàn)室的注意事 項(xiàng)如下： 

        1．細(xì)菌的培養(yǎng)應(yīng)在接種罩或無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)行。有條件的實(shí)驗(yàn)室可在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。 

        2．用接種環(huán)分離和移種細(xì)菌時(shí)，用前用后均需滅菌處理。一般采用火焰滅菌法。 

        3．從培養(yǎng)瓶或試管培養(yǎng)物中取標(biāo)本或移種時(shí)，在打開瓶口、管口或關(guān)閉前，均要在火焰上通過(guò) 2～3次。切不可將含菌材料污染臺(tái)面和其他物體。 

        4．如不慎將試管等打破造成菌液污染時(shí)，不要驚慌，應(yīng)立即報(bào)告負(fù)責(zé)人，然后用3％來(lái)蘇或5％ 石炭酸處理污染臺(tái)面或地面，至少浸泡30分種。 

        5．工作完畢后，用紫外光燈照射30分鐘，或用3％來(lái)蘇擦拭臺(tái)面，并清洗雙手。 

三、培養(yǎng)法 

根據(jù)培養(yǎng)目的和細(xì)菌的種類選用適宜的培養(yǎng)方法。常用的有一般培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法（采用的是二氧化碳培養(yǎng)箱）和 厭氧培養(yǎng)法（采用厭氧培養(yǎng)箱）。 

        （一）一般培養(yǎng)法 一般培養(yǎng)法系指需氧菌或兼性厭氧菌等在需氧條件下的培養(yǎng)方法，故又稱需氧培養(yǎng)法。將已接 種好的置37℃孵箱中培養(yǎng)18～24小時(shí)。但標(biāo)本中菌量很少或難于生長(zhǎng)的細(xì)菌（如結(jié)核分技桿菌）需培養(yǎng)3～7天甚至 l個(gè)月才能生長(zhǎng)。 

        （二）二氧化碳培養(yǎng)法某些細(xì)菌的培養(yǎng)，需要5～10%二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)才能生長(zhǎng)良好。可采用二氧化碳培養(yǎng)箱，它能自動(dòng)調(diào)節(jié)二氧化碳的濃度和溫度，使用極為方便。傳統(tǒng)的方法則采用燭缸法，將培養(yǎng)基放入缸內(nèi)，點(diǎn)燃蠟燭放在缸中，加蓋（涂以凡士林）密閉。因燃燒而產(chǎn)生CO2大約占5～10%，基本可滿足細(xì)菌培養(yǎng)的要求。 

        （三）厭氧培養(yǎng)法厭氧菌標(biāo)本的采集及運(yùn)送有特殊的要求及注意事項(xiàng)，應(yīng)避免正常菌群的污染，盡量少接觸空氣并立刻送檢。厭氧菌的培養(yǎng)法可大致分為：①物理學(xué)方法：遮斷空氣法（層積法）、 真空法、空氣置換法、厭氧罐培養(yǎng)、厭氧袋法、厭氧手套箱等。②化學(xué)方法：焦性沒(méi)食子酸法、硫乙醇酸鈉法、黃磷燃燒法。③生物學(xué)方法： 需氧菌共生法、燕麥發(fā)芽法。④混合法：真空或氣體置換與焦性沒(méi)食子酸法相結(jié)合，可根據(jù)實(shí)際情況選用。