分光光度法是通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度,對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。常用的波長(zhǎng)范圍為:(1)200~400nm的紫外光區(qū)(2)400~760nm的可見(jiàn)光區(qū),(3)2.5~25μm(按波數(shù)計(jì)為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū)。
分光光度計(jì)按照波長(zhǎng)及應(yīng)用領(lǐng)域的不同可以分為:
(1)可見(jiàn)光分光光度計(jì):用來(lái)測(cè)量待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見(jiàn)光(400~760nm)的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器??稍?00nm測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度。
(2)紫外分光光度計(jì):用來(lái)測(cè)量待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見(jiàn)光或紫外光(200~760nm)的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器。可以測(cè)定核酸和蛋白的濃度,也可以測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度。
(3)紅外分光光度計(jì):用來(lái)測(cè)定波長(zhǎng)范圍為大于760nm的紅外光區(qū)的儀器,是研究有機(jī)化合物常用的光譜區(qū)域,能分析各種狀態(tài)(氣、液、固)的試樣,紅外光譜法的特點(diǎn)是:快速、樣品量少(幾微克-幾毫克),特征性強(qiáng)(各種物質(zhì)有其特定的紅外光譜圖)、能分析各種狀態(tài)(氣、液、固)的試樣以及不破壞樣品。
(4)熒光分光光度計(jì):用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器,應(yīng)用于科研、化工、醫(yī)藥、生化、環(huán)保以及臨床檢驗(yàn)、食品檢驗(yàn)、教學(xué)實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域,通過(guò)對(duì)這些參數(shù)的測(cè)定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。
(5)原子吸收分光光度計(jì):光源發(fā)出被測(cè)的特征光譜輻射,被經(jīng)過(guò)原子化器后的樣品蒸氣中的待測(cè)元素基態(tài)原子所吸收,通過(guò)測(cè)定特征輻射被吸收的大小,來(lái)求出被測(cè)元素的含量。
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