Thermo液相色譜柱通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱,或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團(tuán)的鍵合相硅膠柱;反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì),在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(tuán)(ODS)稱(chēng)為C18柱,其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱,GPC柱,聚合物填料柱等。
Thermo液相色譜柱優(yōu)點(diǎn)是固定相穩(wěn)定,應(yīng)用廣泛,可使用多種溶劑。但硅膠為基質(zhì)的填料,使用時(shí)一定要注意流動(dòng)相的PH范圍。一般的C18柱PH值范圍都在2-8,流動(dòng)相的PH值小于2時(shí),會(huì)導(dǎo)致鍵合相的水解;當(dāng)PH值大于7時(shí)硅膠易溶解;經(jīng)常使用緩沖液固定相要降解。一旦發(fā)生上述情況,色譜柱人口處會(huì)塌陷。同樣填料各種不同牌號(hào)的色譜柱不盡相同。如果流動(dòng)相PH較高或經(jīng)常使用緩沖液時(shí),建議選擇PH范圍大的柱子。
Thermo液相色譜柱如何選型:
在選擇Thermo液相色譜柱之前,先多了解自己的樣品和雜質(zhì),他們的類(lèi)型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等,
1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測(cè),即要選擇承受100%純水且對(duì)極性化合物保留很好的色譜柱
2. 如果樣品極性太強(qiáng),或酸性太強(qiáng);可以選擇CN,NH2,或硅膠柱,HILIC(親水色譜),也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱(缺點(diǎn)是離子對(duì)試劑平衡時(shí)間長(zhǎng),對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密,否 則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn),另外離子對(duì)試劑很難洗下來(lái),基本上用了離子對(duì)的色譜柱就不能再用于其它實(shí)驗(yàn))
3. 若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質(zhì),且硅膠端基封尾)或一些經(jīng)過(guò)修飾的C18柱(如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等),他們都會(huì)減少堿性化合物的拖尾,一般會(huì)選擇中性或偏堿的條件下做,因?yàn)檫@樣可增加堿性樣品的保留
4.如果堿性化合物的極性太強(qiáng),或堿性太強(qiáng);可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(cè)(優(yōu)點(diǎn)是方法開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)單,缺點(diǎn)是目前實(shí) 現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少,價(jià)格也高)或者選用HILIC色譜柱(硅膠柱在反相條件下使用,這也是很經(jīng)典的檢測(cè)堿性樣品的方法)選擇強(qiáng)離子交換柱(缺點(diǎn) 是不能用來(lái)分析其它樣品,對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密,否則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn))也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱。
Thermo液相色譜柱在使用前,進(jìn)行柱的性能測(cè)試,并將結(jié)果保存起來(lái),作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測(cè)試時(shí)要按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是*條件),只有這樣,測(cè)得的結(jié)果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同。
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